中藥復(fù)方干預(yù)AML白血病干細(xì)胞NF-κB及FLT3蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、提要目的：目的：本研究旨在通過(guò)研究中藥復(fù)方干預(yù)白血病細(xì)胞FLT3和NFκB的蛋白表達(dá)情況，以探討中醫(yī)藥治療白血病的作用機(jī)制。方法：方法：運(yùn)用中藥對(duì)45例AML患者白血病干細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)免疫印跡法（WesternBloting，WB）觀察干預(yù)前后白血病干細(xì)胞內(nèi)NFκB和FLT3的表達(dá)情況；同時(shí)觀察患者的性別、年齡、治療前外周血白細(xì)胞數(shù)及骨髓原始細(xì)胞比例，以探討其相關(guān)性。結(jié)果：結(jié)果：AML患者（M1、M2、M4、M5）FLT3陽(yáng)性率為6

2、2.2%；FLT3的陽(yáng)性率與患者的FAB分型、性別、年齡無(wú)差異（P＞0.05），與患者的外周血白細(xì)胞總數(shù)、骨髓原始細(xì)胞比例存在差異（P＜0.01）；中藥可下調(diào)白血病干細(xì)胞FLT3和NFκB基因的蛋白表達(dá)水平（P＜0.01）；其中中藥原方組與其拆方扶正組、祛邪組及生理鹽水組（空白對(duì)照組）相比，能夠顯著降低白血病干細(xì)胞FLT3和NFκB基因的蛋白表達(dá)水平（P＜0.01），而扶正組與祛邪組對(duì)白血病干細(xì)胞FLT3和NFκB基因表達(dá)水平的影響無(wú)顯

3、著性差異（P＞0.05）。結(jié)論：結(jié)論：AML患者中存在FLT3的陽(yáng)性表達(dá)；其陽(yáng)性表達(dá)率與患者的年齡、性別、FAB分型無(wú)關(guān)，與患者初發(fā)或復(fù)發(fā)時(shí)外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及骨髓原始細(xì)胞數(shù)成正相關(guān)；中藥復(fù)方可以下調(diào)FLT3及NFκB在AML患者中的表達(dá)，其中原方組較祛邪組、扶正組下調(diào)作用明顯；揭示了扶正組與祛邪組之間存在協(xié)同作用。關(guān)鍵詞AML；NFκB；FLT3；免疫印跡法；中藥目錄引言.................................

4、..............................................................................................1臨床研究.........................................................................................................................

5、......2一、病例選擇.......................................................................................................................2二、診斷標(biāo)準(zhǔn).................................................................................

6、......................................2三、臨床調(diào)查.......................................................................................................................3（一）一般資料統(tǒng)計(jì)..............................................

7、.............................................................3（二）實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)收集.......................................................................................................3實(shí)驗(yàn)研究........................................

8、.......................................................................................4一、主要試劑及耗材...........................................................................................................4二、主要試劑配制.......

9、........................................................................................................4（一）電泳試劑............................................................................................................

10、.......4（二）轉(zhuǎn)移緩沖液...............................................................................................................6（三）封閉液......................................................................................

11、.................................6（四）PBST洗膜液.............................................................................................................6三、主要儀器............................................................

12、...........................................................6四、實(shí)驗(yàn)方法.......................................................................................................................7（一）中藥制備...........................

13、........................................................................................7（二）骨髓單個(gè)核細(xì)胞的提取...........................................................................................7（三）白血病干細(xì)胞的分選和純化...........

14、........................................................................7（四）細(xì)胞培養(yǎng)...................................................................................................................7（五）WesternBloting法檢測(cè)NFκB

15、、FLT3的表達(dá)......................................................7五、統(tǒng)計(jì)方法.......................................................................................................................9統(tǒng)計(jì)結(jié)果...........................

16、..................................................................................................10一、FLT3的統(tǒng)計(jì)結(jié)果.......................................................................................................10（一）F

17、LT3在AML中的表達(dá)條帶.................................................................................10（二）FLT3陽(yáng)性表達(dá)患者在AML各亞型中的分布分析.............................................10（三）FLT3陽(yáng)性患者的年齡分析...................................