貓人參醇提取物對(duì)胃癌前病變大鼠干預(yù)的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景和內(nèi)容:
　　胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，早期診斷早期治療比較困難，晚期治療預(yù)后不良。但胃癌的發(fā)生是個(gè)漫長的過程，從炎癥——異型增生——癌變一般需要10-20年。在癌變前的階段進(jìn)行預(yù)防和治療，能延緩異型增生的進(jìn)程，減少腫瘤的發(fā)生。中醫(yī)藥在治療胃癌前病變(PLGC)上具有優(yōu)勢和特色。貓人參是獼猴桃科植物，功效為清熱解毒，祛風(fēng)除濕消腫，臨床主要用于麻風(fēng)、消化系統(tǒng)腫瘤等的治療。課題組經(jīng)臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)貓人參能改善PLGC的病理狀

2、態(tài)，結(jié)合文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)貓人參主要的活性成分能抑制腫瘤細(xì)胞的生長。本研究主要通過貓人參醇提取物作用于PLGC大鼠的實(shí)驗(yàn)，來探討貓人參醇提取物治療PLGC的療效和機(jī)制。
　　全文分為兩個(gè)部分，第一部分文獻(xiàn)研究主要總結(jié)了中西醫(yī)學(xué)對(duì)PLGC的病因病機(jī)、治療、實(shí)驗(yàn)等方面的研究成果及現(xiàn)階段對(duì)貓人參的認(rèn)識(shí)。第二部分實(shí)驗(yàn)研究建立了PLGC大鼠模型，研究貓人參醇提取物治療和延緩PLGC，阻斷胃癌發(fā)生發(fā)展的分子作用機(jī)制。
　　研究目的:
　

3、　研究貓人參醇提取物對(duì)PLGC大鼠胃黏膜病理變化、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡相關(guān)因子以及mTOR信號(hào)通路的影響.
　　研究方法:
　　100只5周齡左右SD雄性大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為空白組10只，造模組90只。空白組給予正常飲食，造模組給予100ug/ml MNNG自由飲用，0.03％雷尼替丁的標(biāo)準(zhǔn)鼠料，造模開始1-6周每周1次10％氯化鈉溶液1ml灌胃。結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)，從造模22周起每周處死2只大鼠取胃組織觀察病理形

4、態(tài)學(xué)變化，確認(rèn)是否造模成功。24周造模成功后，將存活的84只PLGC大鼠隨機(jī)分為4組，貓人參醇提取物常規(guī)劑量組(0.03g/kg/d醇提取物灌胃)、高劑量組（0.06g/kg/d貓人參醇提取物灌胃）、維甲酸組（0.04g/kg/d灌胃）、模型組。模型組和空白組給予等劑量生理鹽水灌胃。治療持續(xù)16周后處死所有大鼠，通過HE染色、免疫組化、western blot技術(shù)檢測大鼠胃黏膜病理變化、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cycli

5、nD1基因的表達(dá)以及mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:
　　1.空白組10只大鼠，1只死于灌胃不當(dāng)，3只正常，6只慢性淺表性胃炎(CSG)，無腸上皮化生(IM)和異型增生(Dys)。模型組21只大鼠，1只死于灌胃不當(dāng)，2只死于胃癌，CSG8只，CAG5只，IM6只，Dys9只以IM和Dys算PLGC發(fā)生率為15只(83.3％)。貓人參醇提取物常規(guī)劑量組21只大鼠，1只死于灌胃不當(dāng)，1只死于不明原因，CSG

6、11只，CAG2只，IM3只，Dys4只，PLGC7只(36.8％)。貓人參醇提取物高劑量組21只大鼠，2只死于灌胃不當(dāng)，CSG12只，CAG2只，IM3只，Dys2只，PLGC5只(26.3％)。維甲酸組21只大鼠，2只死于不明原因，CSG8只，CAG4只，IM4只，Dys3只，PLGC7只(36.8％)。模型組和空白組比較， PLGC發(fā)生率明顯升高(P＜0.01)，和治療組相比也有顯著差異(P＜0.05)。各治療組之間比較PLGC發(fā)

7、生率無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.Bcl-2、Bax、Caspase-3、CyclinD1蛋白陽性反應(yīng)成棕黃色。經(jīng)過MNNG造模的大鼠Bcl-2、CyclinD1表達(dá)增加。和空白組相比，模型組表達(dá)最為明顯(P＜0.01)，貓人參醇提取物和維甲酸對(duì)Bcl-2、CyclinD1表達(dá)表現(xiàn)出一定的調(diào)節(jié)作用。和模型組相比，貓人參醇提取物和維甲酸能降低Bcl-2、CyclinD1的表達(dá)(P＜0.01)。但貓人參醇提取物常規(guī)劑量組、高劑

8、量組和維甲酸組之間無明顯差異(P＞0.05)。經(jīng)過MNNG造模的大鼠Bax、Caspase-3表達(dá)降低。和空白組相比，模型組表達(dá)下降最為明顯(P＜0.01)，貓人參醇提取物和維甲酸對(duì)Bax、Caspase-3有一定的調(diào)節(jié)作用。和模型組相比，貓人參醇提取物和維甲酸能增加Bax、Caspase-3的表達(dá)(P＜0.01)。但貓人參醇提取物常規(guī)劑量組、高劑量組和維甲酸組之間無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.空白組PI3K、p-Akt、

9、mTOR幾乎無陽性表達(dá)。貓人參醇提取物常規(guī)劑量組、高劑量組、維甲酸組PI3K、p-Akt、mTOR陽性表達(dá)有提高，和空門組比較有差異(P＜0.05)。模型組PI3K、p-Akt、mTOR陽性表達(dá)最高，和貓人參醇提取物常規(guī)劑量組、高劑量組、維甲酸組比較差異顯著(P＜0.05)。
　　4.免疫組化結(jié)果顯示各組胃黏膜上皮幾乎都無陽性表達(dá)的LKB1。Westem blot顯示與空白組比較，模型組LKB1表達(dá)降低。貓人參醇提取物和維甲酸有增

10、強(qiáng)LKB1水平的趨勢。
　　研究結(jié)論:
　　貓人參醇提取物能改善PLGC大鼠的一般狀況，延緩PLGC病理形態(tài)的加重，減少PLGC的發(fā)生率;可以抑制PLGC大鼠胃黏膜上皮Bcl-2、CyclinD1蛋白的表達(dá)，提高PLGC大鼠胃黏膜上皮Bax、Caspase-3蛋白的表達(dá);可以抑制PI3K/Akt/mTOR通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)LKB1的陽性表達(dá)。
　　通過作用于mTOR信號(hào)通路，調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的表達(dá)，影響下游細(xì)胞增殖和