一個(gè)多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤2A型家系的ret原癌基因突變檢測(cè)及相關(guān)探討.pdf

1、目的：
　　多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤2型(Multiple endocrine neoplasia type2,MEN2)是一種以甲狀腺、腎上腺髓質(zhì)和甲狀旁腺神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞發(fā)生增生或瘤變的常染色體顯性遺傳病。對(duì)ret基因突變的檢測(cè)有助于此病的早期診斷和發(fā)現(xiàn)致病基因攜帶者，篩查陽(yáng)性者給予早期干預(yù)可明顯改變其臨床預(yù)后。本文通過對(duì)一個(gè)MEN2A家系進(jìn)行ret基因突變檢測(cè)，以明確引起該家族致病的基因型，并通過ret原癌蛋白的免疫組化染色，觀察re

2、t蛋白在此家系甲狀旁腺腺瘤組織中的表達(dá)情況。
　　方法：
　　研究對(duì)象為一個(gè)MEN2A家系的19名家系成員。
　　1.對(duì)19名家系成員ret基因的第10和11外顯子進(jìn)行擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物純化后進(jìn)行雙向測(cè)序，測(cè)定序列結(jié)果通過互聯(lián)網(wǎng)在NCBI網(wǎng)站上的BLAST程序與ret基因的DNA和cDNA序列進(jìn)行比較，如果顯示異常，則進(jìn)一步與人類基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)(HGMD)進(jìn)行突變基因比較查詢，仍顯示突變者，重復(fù)測(cè)序4次。
　　2

3、.通過免疫組化S-P法，比較此家系中一名MEN2A患者甲狀旁腺腺瘤組織和單純甲狀旁腺腺瘤患者腺瘤組織中ret蛋白的表達(dá)差異。
　　3.該家系19名成員均進(jìn)行甲狀腺、甲狀旁腺、腎上腺B超和骨密度的檢查以及血鈣、血磷、癌胚抗原和甲狀旁腺激素的檢測(cè)，以了解基因型與臨床表型的關(guān)系，并尋找新的MEN2A患者。
　　結(jié)果：
　　1.ret基因第11外顯子的14994位核苷酸正常情況下為純合T。序列分析表明，該家系中MEN2A先證者

4、（II-9）為T-C雜合，634號(hào)編碼子TGC突變?yōu)镃GC，其對(duì)應(yīng)氨基酸由半胱氨酸替換為精氨酸（Cys634Arg）；15165位核苷酸正常情況下為純合G，該先證者為G-A雜合，691號(hào)編碼子呈GGT-AGT的單核苷酸多態(tài)性，其對(duì)應(yīng)氨基酸由甘氨酸替換為絲氨酸（Gly691Ser）。對(duì)先證者哥哥（II-5）、姐姐（II-7）和侄子（Ⅲ-6）ret基因的全部測(cè)序結(jié)果與先證者相同。家系成員(Ⅲ-5)僅691號(hào)編碼子呈GGT-AGT的單核苷酸多

5、態(tài)性。其余家系成員第11外顯子未見異常，全部家系成員第10外顯子均未見異常。
　　2.免疫組化結(jié)果顯示：1名MEN2A患者（II-5，先證者哥哥）甲狀旁腺腺瘤組織的ret陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及著色程度明顯高于單純甲狀旁腺腺瘤患者。
　　3.經(jīng)B超檢查還發(fā)現(xiàn)家系成員(II-5)雙側(cè)甲狀腺，一側(cè)腎上腺及一側(cè)甲狀旁腺有實(shí)性占位病變，成員(II-9)雙側(cè)甲狀腺及一側(cè)腎上腺有實(shí)性占位病變，成員(Ⅲ-6)雙側(cè)甲狀腺，一側(cè)腎上腺和一側(cè)甲狀旁腺有實(shí)性

6、占位病變，成員(II-7)雙側(cè)甲狀腺，雙側(cè)腎上腺和一側(cè)甲狀旁腺有實(shí)性占位病變，成員(Ⅲ-5)僅有甲狀腺多發(fā)性小結(jié)節(jié)。另外有3名成員B超檢查有異常，但所測(cè)定的基因序列無(wú)基因突變。
　　結(jié)論：
　　1.ret基因序列分析表明：此家系中4名MEN2A患者（II-5，II-7，II-9，Ⅲ-6）均存在ret原癌基因第11外顯子Cys(TGC)634Arg(CGC)錯(cuò)義突變和Gly(GGT)691Ser(AGT)的單核苷酸多態(tài)性共存，

7、無(wú)此2位點(diǎn)基因突變的成員無(wú)發(fā)病，顯示ret原癌基因第11外顯子Cys(TGC)634Arg(CGC)錯(cuò)義突變和Gly(GGT)691Ser(AGT)的單核苷酸多態(tài)性共存為該家系MEN2A患者的致病基因。
　　2.成員（Ⅲ-5）僅存在ret原癌基因第11外顯子Gly(GGT)691Ser(AGT)的單核苷酸多態(tài)性，可能為未發(fā)病的基因突變攜帶者，需密切觀察和隨訪。
　　3.和單發(fā)甲狀旁腺腺瘤患者相比，MEN2A患者甲狀旁腺腺瘤組