腎臟缺血再灌注損傷過程中水通道蛋白1、2的表達(dá)變化.pdf

1、目的：腎臟作為一種高灌注器官，對缺血非常敏感，所以在休克復(fù)蘇、擠壓綜合征解壓及腎移植術(shù)后等很容易發(fā)生缺血再灌注損傷(ischemicalreperfusion injury，IRI)。腎IRI是缺血性急性腎功能衰竭(acute renalfailure，ARF)的重要損傷環(huán)節(jié)<'[1]>，也是腎移植中影響移植腎早期功能恢復(fù)及長期存活的主要因素<'[2]>。腎IRI損傷的病理生理機(jī)制非常復(fù)雜，目前對腎IRI病理生理機(jī)制的研究主要集中在活性

2、氧(ROS)、中性粒細(xì)胞、補體系統(tǒng)等方面，而對腎臟存在的水通道蛋白(AQPs)在這一病理生理條件下的作用認(rèn)識不足。為此，本研究通過建立大鼠的腎臟IRI模型觀察其AQP-1、2的表達(dá)變化與腎功能變化的關(guān)系，以從新的角度探討腎臟IRI及ARF的發(fā)病機(jī)理。 方法：建立大鼠左側(cè)腎臟40分鐘缺血再灌注損傷模型。隨機(jī)將實驗動物分為對照和缺血再灌注1、2、3、5、7天組。術(shù)后留取大鼠尿液標(biāo)本進(jìn)行尿液檢測：并于上述不同時間點處死大鼠，留取血清標(biāo)

3、本行腎功能檢測；留取腎臟標(biāo)本應(yīng)用HE染色于光鏡下觀察腎臟的病理形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用半定量RT-PCR方法測定AQP-1、AQP-2 mRNA的表達(dá)水平變化，以及免疫組織化學(xué)染色及Western blot測定AQP-1、AQP-2蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果：1．尿液變化：(1)尿量變化：各對照組間，尿量變化無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；缺血再灌注損傷組大鼠尿量較對照組逐漸增多，并于術(shù)后第3天達(dá)到最高(p<0.01)；以后逐漸減少，術(shù)后

4、第7天恢復(fù)正常(p>0.05)。(2)尿滲透壓變化：各對照組間，尿滲透壓變化無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；缺血再灌注損傷組大鼠尿滲透壓較對照組逐漸降低，術(shù)后第3天達(dá)到最低(p<0.01)，以后逐漸增高，術(shù)后第7天恢復(fù)正常(p>0.05)。 2．腎功能的變化：各對照組間，腎功能變化無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)： 缺血再灌注組大鼠術(shù)后血肌苷、尿素氮較對照組逐漸升高，于術(shù)后第三天達(dá)到最高(p<0.01)，以后逐漸降低；術(shù)后第七

5、天恢復(fù)正常(p>0.05)。 3．腎組織學(xué)變化：術(shù)后HE染色可見缺血再灌注組大鼠的腎小管上皮細(xì)胞較對照組明顯腫脹壞死脫落。 4．AQP-1、AQP-2 mRNA表達(dá)變化：各對照組間，AQP-1、AQP-2mRNA表達(dá)變化無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；缺血再灌注損傷組大鼠腎臟AQP-1、AQP-2 mRNA表達(dá)水平較對照組逐漸降低；AQP-1于術(shù)后第1天達(dá)到最低，以后又逐漸升高，于術(shù)后第5天恢復(fù)正常(p>0.05)；AQP-2于術(shù)

6、后第3天最低，以后逐漸增加于術(shù)后第7天恢復(fù)正常(p>0.05)。 5．免疫組織化學(xué)及Western blot檢測AQP-1、AQP-2的變化：各對照組間，AQP-1、AQP-2表達(dá)變化無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；缺血再灌注組大鼠腎臟AQP-1的表達(dá)量較對照組逐漸減少，于術(shù)后第1天達(dá)到最低(p<0.01)，以后逐漸增高，于術(shù)后第5天恢復(fù)正常(p>0.05)：AQP-2的表達(dá)量較對照組逐漸減少，于術(shù)后第3天達(dá)到最低(p<0.01)

7、，以后逐漸增高，于術(shù)后第7天恢復(fù)正常(p>0.05)。 結(jié)論：1．實驗大鼠腎臟發(fā)生缺血再灌注損傷后，腎小管上皮細(xì)胞明顯腫脹、壞死脫落；24h尿量、血肌苷、尿素氮升高：尿滲透壓降低，提示缺血再灌注損傷是急性腎小管壞死及進(jìn)一步導(dǎo)致急性腎功能衰竭的誘因之一。 2．實驗大鼠腎臟缺血再灌注損傷后出現(xiàn)尿量增多、尿滲透壓降低等癥狀的同時伴有AQP-1、AQP-2表達(dá)的減少，提示腎臟發(fā)生缺血再灌注損傷后腎小管上皮細(xì)胞AQP-1、AQP-