終末期腎病患者血清游離氨基酸水平的變化及其影響因素的研究.pdf

1、營(yíng)養(yǎng)不良在終末期腎病(EndStageRenalDisease，ESRD)以及維持性血液透析和腹膜透析患者中十分常見(jiàn)，與患者的發(fā)病率和死亡率增高相關(guān)，是影響患者預(yù)后及生存質(zhì)量的重要因素。在急、慢性腎功能衰竭患者中，約有20％-40％患者存在蛋白質(zhì)/氨基酸代謝異常和營(yíng)養(yǎng)不良。以往對(duì)ESRD患者的營(yíng)養(yǎng)研究主要集中于蛋白質(zhì)—能量營(yíng)養(yǎng)不良以及透析本身對(duì)于整體營(yíng)養(yǎng)的影響。而對(duì)ESRD患者血清游離氨基酸代謝以及對(duì)氨基酸代謝的相關(guān)影響因素的研究較少。

2、影響ESRD患者營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的因素是多方面的，主要有飲食攝入減少、尿毒素、酸中毒、感染、炎癥、內(nèi)分泌紊亂和殘存腎功能等。有研究顯示在進(jìn)入透析之前，已有部分ESRD患者存在蛋白質(zhì)/氨基酸代謝的異常。但ESRD患者血清氨基酸的水平變化如何以及影響血清氨基酸代謝的因素如酸中毒、腎功能、炎癥與其關(guān)系如何?尚無(wú)定論。 常用的血清氨基酸分析方法主要是離子交換色譜法和反相高效液相色譜法，與高效毛細(xì)管電泳(High-performanceCapil

3、laryElectrophoresis，HPCE)相比，方法復(fù)雜、分析費(fèi)時(shí)、成本也較高。HPCE具有高效、快速、靈敏、進(jìn)樣少、成本低等優(yōu)點(diǎn)。故此，本研究用高效毛細(xì)管電泳法分析正常人與ESRD患者血清游離氨基酸水平的變化，并探討炎癥因子、酸中毒及殘存腎功能對(duì)氨基酸代謝影響及其與白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白的相互關(guān)系。 材料與方法 病例選擇為經(jīng)臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查診斷為ESRD(內(nèi)生肌酐清除率＜15ml/min)，尚未開(kāi)始透析的患者共40例

4、，除外活動(dòng)性肝臟疾病、感染和腫瘤。健康對(duì)照者24例。于清晨空腹時(shí)分別取外周靜脈無(wú)抗凝血4ml和EDTA抗凝血2ml。無(wú)抗凝血離心后取上清液500μl檢測(cè)白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和肌酐的水平，另取上清液500μl加乙腈混勻，離心后取上清液加2，4-二硝基氟苯進(jìn)行衍生化反應(yīng)，用毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)血清氨基酸水平；抗凝血離心后取上清液，用ELISA試劑盒檢測(cè)血漿促炎癥因子IL-6和TNF-α的水平。 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，根據(jù)方差齊性檢驗(yàn)結(jié)

5、果，組間比較采用單因素方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson積矩相關(guān)分析。所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.經(jīng)過(guò)毛細(xì)管條件優(yōu)化選擇，選擇30kV，15℃條件下，0.03MpH9.8的硼砂緩沖液體系。用毛細(xì)管電泳可以在8分鐘之內(nèi)將血漿氨基酸分離出15個(gè)峰，其中有12種氨基酸可以達(dá)到完全分離。 2.與正常人相比，ESRD患者血清非必需氨基酸(NEAA)中除Tyr

6、和Ser濃度降低外，其他氨基酸濃度均升高，其中Tyr、Cys、Pro和Gly濃度的變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Ser/Gly比值下降有顯著性差異。而血清必需氨基酸(EAA)濃度在ESRD患者中均降低，與正常人比較，Trp、Val、Thr濃度的變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Val/Gly比值下降有顯著性差異。 3.按Hb水平分為＞90g/L，60g/L≤Hb≤90g/L，＜60g/L3組進(jìn)行分層分析，3組之間氨基酸水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但是，Ser/G

7、ly比值與Hb和Hct值呈顯著性正相關(guān)。Gly與Hct呈顯著性正相關(guān)，其他氨基酸與Hct均無(wú)顯著性相關(guān)。 4.Cys、Val濃度和Val/Gly比值與ALB存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的正相關(guān)關(guān)系。進(jìn)一步將ALB按＞30g/L，20g/L≤ALB≤30g/L，＜20g/L分成3個(gè)亞組，分層分析結(jié)果顯示3組間Val濃度存在顯著性差異。另外，Tyr、Pro、Gly、Val與TF存在顯著的正相關(guān)關(guān)系。 5.Tyr、His、Cys濃度與酸中毒

8、存在顯著負(fù)相關(guān)。Tyr、His、Asn、Trp濃度在CO2CP≤18.65mmol/L組患者顯著低于CO2CP＞18.65mmol/L組患者。6.ESRD患者血TNF-α、IL-6和CRP升高，與正常人比較，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ESRD患者炎癥因子的變化與氨基酸水平的關(guān)系多為負(fù)相關(guān)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 7.Tyr、Cys、Gly、Val濃度與內(nèi)生肌酐清除率存在顯著正相關(guān)，Tyr和Val濃度與血尿素氮存在顯著正相關(guān)。 結(jié)論

9、 1.本研究成功建立高效毛細(xì)管電泳優(yōu)化條件，并較好地分離人血清游離氨基酸； 2.ESRD患者血清游離氨基酸代謝與正常人存在差異；非必需氨基酸多數(shù)升高，以半胱氨酸、脯氨酸和甘氨酸顯著增高為主，而必需氨基酸普遍下降，其中以色氨酸、纈氨酸、蘇氨酸顯著下降。 3.酸中毒、殘存腎功能顯著影響ESRD患者血清游離氨基酸水平。ESRD患者血清游離氨基酸水平與殘余腎功能有不同程度的相關(guān)關(guān)系。 4.部分氨基酸代謝可能影響患