人N端脂多糖結(jié)合蛋白（tLBP）基因的克隆表達(dá)及保護(hù)作用的研究.pdf

1、該課題在已獲得人LBP全長(zhǎng)cDNA的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)了擴(kuò)增tLBP基因的引物,成功克隆到目的基因片段,并順利插入桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFASTBAC以及完成了目的基因的特異轉(zhuǎn)座和病毒重組,成功構(gòu)建了桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng).應(yīng)用Sf21昆蟲細(xì)胞和BAC-TO-BAC桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)、TALON金屬鏊合層析等方法表達(dá)純化了重組的人N末端脂多糖結(jié)合蛋白cDNA的表達(dá)產(chǎn)物,通過(guò)Lowry,SDS-PAGE,Western blot及毛細(xì)管電泳等方法對(duì)表達(dá)產(chǎn)物

2、進(jìn)行生化特性鑒定,經(jīng)體外與LPS結(jié)合及細(xì)胞評(píng)價(jià)活性實(shí)驗(yàn)表明,純化的重組人tLBP蛋白具有與LPS結(jié)合的能力,且在細(xì)胞水平顯示出一定的結(jié)合或中和LPS的生物活性.在上述工作工作基礎(chǔ)上,通過(guò)對(duì)昆明小鼠在內(nèi)毒素LPS致傷與保護(hù)劑作用前后的動(dòng)態(tài)對(duì)比觀察,以及對(duì)小鼠LPS致死性攻擊與保護(hù)的動(dòng)物死亡率觀察,結(jié)果顯示重組的N端脂多糖結(jié)合蛋白(tLBP)對(duì)內(nèi)毒素?fù)p害小鼠有一定的保護(hù)作用.提示tLBP可能結(jié)合或中和了部分LPS,從而減弱相關(guān)炎性細(xì)胞因子和