脂多糖結(jié)合蛋白功能位點(diǎn)分析及其抑制性多肽的篩選.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文脂多糖結(jié)合蛋白功能位點(diǎn)分析及其抑制性多肽的篩選姓名：徐德斌申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（呼吸系?。┲笇?dǎo)教師：錢桂生20040501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文7中獲得了可與LPS結(jié)合的噬菌體克隆再經(jīng)過2輪LBP競爭性篩選獲得了可與LBP競爭性結(jié)合LPS的噬菌體克隆2.從獲得的可與LBP競爭性結(jié)合LPS的噬菌體肽庫中隨機(jī)挑取100個噬菌體克隆進(jìn)行結(jié)合實驗和競爭抑制實驗結(jié)合實驗發(fā)現(xiàn)100個克隆中有72個克隆與LPS有較

2、高的結(jié)合活性進(jìn)一步的競爭抑制實驗表明其中16個噬菌體克隆具有與LBP競爭結(jié)合LPS的活性進(jìn)一步進(jìn)行功能篩選3.細(xì)胞因子生成抑制實驗發(fā)現(xiàn)9個噬菌體克隆可顯著抑制LBP增敏LPS誘導(dǎo)PBMC分泌TNF的作用LPS內(nèi)化抑制實驗表明這9個噬菌體克隆均無抑制LBP增強(qiáng)LPS內(nèi)化作用的活性其展示肽具有抑制LBP致炎作用的活性根據(jù)上述9個噬菌體克隆基因中插入的外源DNA序列推導(dǎo)出呈現(xiàn)的多肽序列這9個噬菌體克隆融合多肽的核心序列為WKXRKXFXKXX

3、GLBP分子一級結(jié)構(gòu)中有一個與多肽序列相似的序列位于LBP分子的91102位氨基酸WKVRKSFFKLQGLBP的91102位氨基酸片段可能為其致炎功能位點(diǎn)4.LPS內(nèi)化抑制實驗發(fā)現(xiàn)3個噬菌體克隆具有抑制LBP增強(qiáng)LPS內(nèi)化作用的活性細(xì)胞因子生成抑制實驗表明這3個噬菌體克隆均無抑制LBP增敏LPS誘導(dǎo)PBMC分泌TNF的作用這3個噬菌體克隆所展示的融合多肽具有抑制LBP抗炎作用的活性這3個噬菌體克隆融合肽DNA序列一致推導(dǎo)融合表達(dá)的12

4、肽序列為FHTRWNYWPYLH可以模擬LBP的抗炎功能位點(diǎn)LBP分子一級結(jié)構(gòu)中沒有與FHTRWNYWPYLH相似的序列提示該序列可能是LBP與LPS結(jié)合的一個模擬位點(diǎn)而不是線性位點(diǎn)5.應(yīng)用FMOC固相合成法成功合成LBP致炎活性抑制肽多肽序列為LBP91102氨基酸序列WKVRKSFFKLQGNH2純度在95%以上分子量1523.6與理論值相符合成的LBP致炎作用抑制肽可顯著抑制LBP增敏LPS誘導(dǎo)PBMC分泌TNF的活性結(jié)論1.本研