禽4型腺病毒的分離鑒定及其華中地區(qū)分子流行病學調(diào)查.pdf

1、心包積液綜合征(hydropericardium syndrome，HPS)是由禽4型腺病毒(Serotype4Fowl Adenovirus，F(xiàn)AdV-4)引起的病毒性傳染病，由于首次爆發(fā)于巴基斯坦的安卡拉地區(qū)，因此也被稱為安卡拉病毒。FAdV-4是一種無囊膜，雙鏈DNA病毒，病毒粒子在70-90nm，屬于腺病毒科，禽腺病毒屬，禽腺病毒C種。FAdV-4主要感染3-5周齡的肉雞、蛋雞，臨床癥狀主要表現(xiàn)為黃色或淡黃色的心包積液，而且大多

2、數(shù)情況伴隨有肝臟腫大。
　　2015年7月以來，F(xiàn)AdV-4在中國多個地區(qū)中小型肉雞場、蛋雞場屢屢爆發(fā)，給中國的家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失。由于缺乏對中國流行的FAdV-4毒株的分子進化特征和致病性特征的了解，目前暫無有效的防控措施。本研究從河南爆發(fā)該病的12個地級市采樣，并進行病毒的分離鑒定和分子流行病學調(diào)查，也對致病情況進行了初步研究，旨在為該病的防控提供新線索。
　　本研究從河南境內(nèi)的安陽、鶴壁、濮陽、新鄉(xiāng)、焦(竹)、鄭州

3、、開封、商丘、許(昌)、周口、平頂山、漯河采樣，通過雞胚絨毛尿囊膜途徑分離病毒，PCR和測序的方法鑒定。最終分離到了地域來源不同的12個毒株，并雞肝原代細胞(CEL)上穩(wěn)定傳代，為FAdV-4的進一步研究奠定基礎。
　　本研究基于Hexon基因，對文分離的12個毒株和24個參考毒株構(gòu)建進化樹，結(jié)果表明:本次分離毒株屬于禽4型腺病毒毒株，本次中國爆發(fā)的主要毒株與之前流行的毒株在遺傳關系上較遠，與印度的兩個毒株PJ-06和PK-01親

4、緣關系較近。同時進行核酸和氨基酸對比分析，結(jié)果表明:與同一簇中的ON1、KR5、MX-SHP95、PK-01、PJ-06毒株相比較，本次毒株的Hexon基因的核苷酸差異率分別為1.31％、1.10％、1.42％、2.77％、2.84％。結(jié)合進化樹和氨基酸分析，表明本次分離的12個毒株處于同一相對獨立的分支，可能具有共同的來源，同時本次流行的毒株不是來源于本土毒株，而是來源于印度的毒株。
　　本研究基于Hexon蛋白基因，設計引物，

5、構(gòu)建標準質(zhì)粒，建立了RT-PCR的定量檢測方法。在標準質(zhì)粒拷貝數(shù)在102-109范圍內(nèi)，CT值與拷貝數(shù)具有良好的線性關系，特異性和重復性良好。同時選擇HNZZ分離毒株通過肌肉注射人工感染21日齡SPF雛雞，對照組注射等劑量的無菌生理鹽水。逐日觀察記錄雞的精神狀態(tài)、發(fā)病情況、飲食飲水情況和存活時間，死亡后采集心臟、肝臟等器官，觀察各器官病理組織學變化。結(jié)果顯示，感染組雞只出現(xiàn)精神沉郁、食欲不振、嗜睡等癥狀，并在2-3天內(nèi)全部死亡，解剖發(fā)現(xiàn)