山東部分地區(qū)祖代、父母代、商品代蛋雞群禽白血病流行病學調查及病毒分離鑒定.pdf

1、自1988年Payne L等發(fā)現ALV-J以來，幾乎在全世界的白羽肉雞群中發(fā)現了此病。近十年來，蛋雞品系中也出現ALV-J的感染，且地方品系雞中ALV-J的感染也頻見報道。而且，ALV-J發(fā)病出現了新的特點，一：發(fā)病日齡提前，感染范圍增大；二：發(fā)病形式更是多種多樣，同時出現了多種病毒的混合感染的現象，給防治帶來的新的難題；三：血管瘤型ALV-J的出現，除導致髓細胞瘤的發(fā)生外，病雞在外表皮膚、關節(jié)、毛囊或內臟等出現血泡或血洞，病雞常因大量

2、失血而死亡。
　　 本文為了解山東地區(qū)蛋雞禽白血?。ˋvian Leukosis，AL）流行情況，從泰安、臨沂、青島、聊城等4個地區(qū)的祖代種雞及其相應的父母代、商品代雞場無菌采集1 827份血清（祖代雞血清597份、父母代雞血清710份、商品代雞血清520份）和1 209份泄殖腔棉拭子（祖代雞棉拭子597份、父母代雞棉拭子460份、商品代雞棉拭子152份）。通過ELISA試劑盒進行了ALV-J、ALV-AB抗體檢測及P27抗原檢

3、測。檢測結果顯示，山東地區(qū)祖代種雞未檢測到ALV-J抗體，ALV-AB抗體檢出率極低，僅為0.84％，但個別祖代雞場P27抗原的陽性率較高，可能主要與不規(guī)范雜交擴繁導致內源性病毒感染有關，也不能排除免疫耐受感染因素；父母代種雞ALV-J抗體水平均較高，明顯高于ALV-AB抗體陽性水平，P27抗原的陽性率也有所升高；商品蛋雞ALV-J及ALV-AB抗體水平明顯高于父母代水平，但P27抗原陽性率未見明顯增加。
　　 本研究在上述某商

4、品代蛋雞場采血時發(fā)現疑似血管瘤型病雞，并且在其父母代及祖代雞群中也發(fā)現疑似ALV病雞。通過PCR、IFA及ELISA檢測方法，從該具有血緣關系的祖代、父母代及商品代雞中分離到共6株ALV-J，其中祖代、父母代中各分離到1株病毒，分別命名為SDDP1001株和SDDP1002株；商品代蛋雞中分離到4株病毒，分別命名為SDDP1003株、SDDP1004株、SDDP1005株、SDDP1006株，在國內尚屬首次。根據ALV-J原型毒株HPR

5、S103設計一對特異性引物，擴增gp85基因，并與各亞群參考毒株序列核苷酸進行同源性分析，結果顯示：分離自商品代蛋雞的SDDP1003株、SDDP1004株、SDDP1006株和父母代分離株SDDP1002位于同一分支，同源性在97.2％-97.9％之間，與HPRS103株同源性94.7％-95.2％；SDDP1005與祖代分離株SDDP1001株在同一分支，與HPRS103株同源性為98.3％,4株分離自商品代的ALV-J同源性為95

6、.0％-99.9％；6株病毒與A亞群代表株RAV-1A和B亞群代表株RAV-2 B的同源性僅在12.0％-12.8％之間，與E亞群代表株ev-1 E同源性為12.2％-12.4％之間。選取三株代表病毒（SDDP1001株、SDDP1002株和SDDP1006株）進行病毒的毒價及復制動力學特性分析，結果表明：分離自祖代的病毒株滴度最高，為105.59 TCID50/0.1ml，而父母代SDDP1002株和商品代SDDP1006株病毒滴度相

7、近，分別為104.61 TCID50/0.1ml和104.71 TCID50/0.1ml，三株病毒具有相似的復制動力學曲線。等量三株病毒分別感染DF-1細胞，檢測結果表明，等量病毒感染細胞后在相同時間內祖代SDDP1001株病毒上清中含有更高的感染性病毒。病毒分離結合ELISA（或者IFA）的檢測方法是ALV-J感染的“金標準”，但是費時費力，而且 ELSIA檢測試劑盒價格昂貴，不適用于雞場進行大規(guī)模檢測。此外，由于ALV-J感染細胞后

8、不產生細胞病變，不能通過組織半數感染量對病毒進行定量。因此，為了更好進行臨床樣品的檢測和實驗室研究，需要建立一種快捷、簡便、靈敏，并且能夠的定量的ALV-J檢測方法。本研究中針對pol基因和env基因結合處保守區(qū)域設計了一對特異性引物和一條探針，建立了TaqMan實時熒光定量PCR方法，通過對熒光定量PCR的反應體系和反應條件的摸索優(yōu)化，使得其在101～1010copy/μl具有良好的線性關系。同時進行了重復性、特異性、敏感性試驗，結果