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文檔簡介
1、本研究通過對PCR熱循環(huán)條件、特征峰值識別、等位變異賦值以及多重電泳體系構建等進行探索,以檢測結果準確、穩(wěn)定、快速為原則,建立基于SSR熒光標記的小麥品種高通量檢測技術,并應用于2014年區(qū)域試驗品種的特異性、一致性、穩(wěn)定性和真實性鑒定,以及2009-2013年河北省區(qū)域試驗品種的DNA指紋圖譜構建和遺傳差異分析。研究結果如下:
1、對PCR反應的熱循環(huán)參數進行摸索,減少了PCR產物非特異性擴增。分析毛細管電泳峰形的特征,對特
2、征峰值和非特征峰值進行識別,確保讀取數據的一致性和準確性。利用參照樣品,將42對標記各個等位變異的參照品種進行賦值,同時確定了每對SSR熒光標記的具體峰值片段范圍,為多重電泳構建立奠定基礎。
2、將不同熒光標記或峰值片段范圍不同的相同熒光標記進行分組,根據品種鑒定需要,構建6-8重電泳組合,同時對不同熒光的PCR產物的混合比例及電泳體系體系進行優(yōu)化。結果表明,毛細管電泳方法的檢測效率、準確性、靈敏度均高于垂直板凝膠電泳方法,并
3、將兩種電泳方法的檢測數據進行有效轉換和分析,確保前期小麥DNA指紋數據庫的持續(xù)應用。
3、構建了179個參試品種的DNA指紋圖譜,對不同組別品種進行遺傳多樣性分析表明,北部麥區(qū)遺傳多樣性最豐富,黃淮南片和河南省區(qū)域試驗品種最低。其中16個品種一致性較差,4個品種不具備真實性。
4、采用42個SSR標記構建2009-2013年70份河北省區(qū)域試驗小麥品種的DNA指紋圖譜,并進行遺傳差異分析。結果表明,42個SSR引物在
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