富硒姬松茸提取物硒蛋白多糖在體內(nèi)與體外的抗腫瘤效果研究.pdf

1、姬松茸，原產(chǎn)于巴西原始森林，1988年以來這種菌類植物已在日本和印度尼西亞廣泛人工栽培。1995年中國科學(xué)院植物所梁凈教授采用來自巴西原始森林的野生菌種在福建栽培成功，命名為國產(chǎn)姬松茸(也稱為梁金菇)。姬松茸的主要成分如類固醇、多糖、糖蛋白復(fù)合物以及核酸等已被分離和純化。其中發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖具有抗腫瘤、提高機體免疫力及抗突變、殺菌作用等作用。2000年在我國第二大富硒區(qū)陜西省紫陽縣秦巴山一帶栽培成功，故命名為富硒姬松茸。已有的研究表明巴西

2、姬松茸的藥理學(xué)效應(yīng)會受到不同生長條件的影響。而此富含硒的姬松茸抗腫瘤效應(yīng)國內(nèi)外尚未相關(guān)研究報道。 本研究從栽培于我國的富硒姬松茸中分離純化出硒蛋白多糖。應(yīng)用Lowry酚試劑法、苯酚-硫酸法、2，3-二氨基萘熒光分光比色法測定硒蛋白多糖中蛋白質(zhì)、多糖及硒含量，以半數(shù)致死量(LD50)評價其毒性水平。 絕大多數(shù)應(yīng)用血清藥理學(xué)法的研究中，使用的藥物處理血清主要來自于正常動物血清，部分來自于病理動物模型(如荷瘤)血清，盡管眾多文

3、獻報道二者均具有良好的實驗結(jié)果，然而兩者之間的差異仍然未見相關(guān)研究報道。 因此，本文通過體內(nèi)、體外實驗研究了硒蛋白多糖抗腫瘤效果并對比研究了硒蛋白多糖處理荷瘤與非荷瘤小鼠血清體外抗腫瘤效果的差異。具體內(nèi)容如下： 1.體內(nèi)實驗通過建立荷瘤小鼠模型，觀察富硒姬松茸提取物-硒蛋白多糖的體內(nèi)抑瘤作用及對荷瘤小鼠免疫功能的影響。 2.體外實驗應(yīng)用血清藥理學(xué)方法，用硒蛋白多糖處理荷瘤與非荷瘤小鼠后分離出血清，用MTT法觀察硒

4、蛋白多糖處理血清對K562細胞增殖的影響；形態(tài)學(xué)、DNA電泳技術(shù)觀察凋亡發(fā)生；比色法檢測凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3的活性。 研究結(jié)果顯示： 1.硒蛋白多糖中，蛋白質(zhì)、多糖及硒含量分別為16.32％、81.20％、7.01mg/g。其半數(shù)致死量(LD50)>3.0g/kg，屬于低毒性物質(zhì)。 2.體內(nèi)實驗結(jié)果表明，硒蛋白多糖50.0、100.Omg/kg可以顯著抑制BALb/c小鼠移植性肉瘤S180的生長，其抑瘤

5、率分別為22.00％、和37.69％。并具有明顯促進荷瘤小鼠NK細胞殺傷活性和淋巴細胞增殖的作用。提示硒蛋白多糖的抗腫瘤效應(yīng)與其增強機體免疫力密切相關(guān)。 3.體外實驗結(jié)果表明，硒蛋白多糖處理血清可明顯抑制體外K562細胞的增殖、誘導(dǎo)K562細胞產(chǎn)生典型的凋亡形態(tài)學(xué)變化，諸如核片段和凋亡小體的形成。DNA電泳中梯形帶形成，這一經(jīng)典的生化指標進一步證實了凋亡誘導(dǎo)作用。 4.硒蛋白多糖處理血清可增強K562細胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因C

6、aspase-3的活性，提示硒蛋白多糖處理的荷瘤小鼠血清促凋亡效應(yīng)可能與上調(diào)Caspase-3基因表達有關(guān)。 5.荷瘤小鼠與非荷瘤小鼠之間的硒蛋白多糖處理血清抗腫瘤作用有顯著性差異(P＜0.01)，這一研究結(jié)果說明：要使實驗結(jié)果能準確代表體內(nèi)的真實環(huán)境，實驗者在應(yīng)用血清藥理學(xué)實驗方法進行實驗時，應(yīng)重視病理動物模型的建立。 總之，本文通過體內(nèi)、體外實驗對栽培于我國富硒姬松茸的抗腫瘤效果及機制的研究，揭示了富硒姬松茸提取物-