納米硒化黑木耳多糖抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的:本研究通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化液體發(fā)酵及發(fā)酵罐發(fā)酵獲得黑木耳胞外多糖，并通過(guò)乙醇沉淀法分離胞外多糖，以黑木耳多糖為原料對(duì)其進(jìn)行納米硒化，并進(jìn)一步考察納米硒化黑木耳多糖的抗菌活性和抗腫瘤活性，旨在為進(jìn)一步對(duì)納米硒化黑木耳多糖研究奠定基礎(chǔ)，為更合理開(kāi)發(fā)和利用黑木耳這一藥用資源提供依據(jù)。
　　方法:以黑木耳菌原菌作為材料，在無(wú)菌條件下對(duì)黑木耳菌進(jìn)行PDA培養(yǎng)。對(duì)培養(yǎng)成功后的黑木耳菌轉(zhuǎn)移至液體培養(yǎng)基中，并通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化液體發(fā)酵的培養(yǎng)條件。

2、單因素法優(yōu)化發(fā)酵罐發(fā)酵條件。培養(yǎng)液體所得的黑木耳多糖通過(guò)苯酚硫酸法來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)黑木耳多糖進(jìn)行納米硒化，并將納米硒化后的黑木耳多糖通過(guò)TEM進(jìn)行表征，觀察并測(cè)量其粒徑大小?？疾焖眉{米硒化黑木耳多糖的抗菌和抗腫瘤活性，通過(guò)MTT法進(jìn)行納米硒化黑木耳多糖的抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果:白色絲狀體黑木耳菌在擴(kuò)大培養(yǎng)的PDA培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)良好。響應(yīng)面法優(yōu)化的液體培養(yǎng)基適合黑木耳菌生長(zhǎng)。黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖的最優(yōu)條件為碳源可溶性淀粉3％、

3、氮源胰蛋白胨0.15%、水果皮莎白瓜皮4%、中藥材紅景天10%，在此條件下的黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖含量為0.02451 g/ml。發(fā)酵罐培養(yǎng)單因素試驗(yàn)中，最佳溫度為26℃，在此條件下胞外多糖含量最高。最佳轉(zhuǎn)速為120r/min，在此條件下胞外多糖含量最高。利用實(shí)驗(yàn)獲得的納米硒化黑木耳多糖溶液進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，其中對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度為50mg/mL，抑菌圈直徑為7.34mm；對(duì)枯草桿菌的最小抑菌濃度為25mg/mL，抑菌圈直徑為

4、6.58mm；對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度為12.5mg/mL，抑菌圈直徑為7.95mm；對(duì)綠膿桿菌的最小抑菌濃度為50mg/mL，抑菌圈直徑為6.97mm。通過(guò)納米硒化黑木耳多糖進(jìn)行抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，1.5mg/ml的抑制率為61.27%，1mg/ml的抑制率為44.22%，0.5mg/ml的抑制率為41.36%，0.25mg/ml的抑制率為36.75%，0.125mg/ml的抑制率為28.96%。
　　結(jié)論:以黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖為

5、考察目標(biāo)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得了黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖的最優(yōu)條件，在此優(yōu)化條件下的黑木耳菌液體發(fā)酵胞外多糖含量最高。同時(shí)在發(fā)酵罐培養(yǎng)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)獲得的培養(yǎng)最優(yōu)條件下，也可以獲得較高含量的黑木耳多糖。通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得納米硒化黑木耳多糖溶液，并且采用TEM進(jìn)行了表征，符合納米的粒徑要求。在抑菌實(shí)驗(yàn)中，可以觀察到納米硒化黑木耳多糖溶液對(duì)大腸桿菌抑菌效果最佳。通過(guò)納米硒化黑木耳多糖抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，濃度越高抑制效果越好，最佳濃度為1.5 mg/ml，其抑制率為61