黑木耳水溶性多糖的分離純化及其免疫調(diào)節(jié)活性研究.pdf

1、黑木耳(Auricularia auricular judae)隸屬于擔(dān)子菌門、傘菌亞門，是我國(guó)珍貴的藥食兩用大型真菌，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，其含有的多糖具有多種生物活性功能。大量研究表明，黑木耳多糖具有調(diào)節(jié)免疫力、抗腫瘤、抗炎等生物活性功能。目前研究黑木耳多糖的免疫調(diào)節(jié)活性尚不全面，且對(duì)免疫調(diào)節(jié)活性的構(gòu)效關(guān)系研究更是罕見(jiàn)，為此，本文以黑木耳為原料，對(duì)黑木耳多糖的提取分離純化、免疫調(diào)節(jié)活性及基本結(jié)構(gòu)表征進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下：
　

2、　(1)選擇液料比、攪拌轉(zhuǎn)速、提取時(shí)間、提取溫度和顆粒大小分別進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)考察對(duì)黑木耳多糖得率的影響，在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取顆粒大小(目數(shù))、液料比、攪拌轉(zhuǎn)速、提取時(shí)間4個(gè)因素為考察因素，進(jìn)行L9(34)正交設(shè)計(jì)，得到黑木耳多糖的最優(yōu)提取條件為原料顆粒大小為80目，液料比為30:1(ml/g)，沸水浴加熱，攪拌轉(zhuǎn)速為200r/min，提取70min。在此條件下，黑木耳粗多糖的提取得率在8％以上。
　　(2)按最佳提取工藝條件對(duì)

3、黑木耳進(jìn)行提取，提取液經(jīng)脫蛋白、去除小分子后，采用不同濃度的乙醇濃度分步醇沉，透析、凍干后得到兩種黑木耳多糖，命名為AAP-10、AAP-80，采用苯酚硫酸法和硫酸咔唑法測(cè)定了多糖含量和糖醛酸含量，結(jié)果為分別為96.35%和98.36%；糖醛酸含量分別為23.76%和30.14%。
　　(3)兩種黑木耳多糖采用DEAE-52陰離子交換柱和葡聚糖凝膠柱分離純化后，各得到主要純化組分，組分均一，分別命名為AAP-10-Se和AAP-8

4、0-Se。
　　(4)采用環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠模型研究了AAP-10-Se和AAP-80-Se的免疫調(diào)節(jié)活性。結(jié)果顯示兩種多糖組分提升脾臟指數(shù)、增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能、NK細(xì)胞活性以及脾淋巴增殖能力，說(shuō)明這兩種多糖對(duì)特異性免疫細(xì)胞和非特異性免疫細(xì)胞均有作用，可被開(kāi)發(fā)為免疫調(diào)節(jié)劑，且以AAP-10-Se的效果更好。
　　(5)紫外光譜掃描結(jié)果表明兩種多糖組分均不含有核酸和游離蛋白；紅外光譜掃描結(jié)果顯示兩種多糖具有多糖特征吸

5、收峰，而且具有β吡喃糖苷鍵的特征吸收峰。
　　(6)純度鑒定和分子量測(cè)量采用HPGPC方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種多糖組分均一，AAP-10-Se數(shù)均分子量和重均分子量分別是6.56×105Da和4.44×106Da；AAP-80-Se的數(shù)均分子量和重均分子量分別是3.75×105Da和1.49×106Da，AAP-10-Se的分子量比AAP-80-Se的大。
　　(7)采用PMP柱前衍生-高效液相法和糖腈乙?；瘹庀喾▽?duì)兩種多糖的單糖

6、組成進(jìn)行分析，PMP柱前衍生化法分析結(jié)果表明，AAP-10-Se主要由甘露糖和葡萄糖組成，單糖相對(duì)含量為14.34%:85.66%；而AAP-80-Se主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和木糖組成，單糖相對(duì)含量為53.6%:12.5%:25.71%:8.2%。糖腈乙酰化氣相法分析結(jié)果表明，AAP-10-Se的單糖種類及各單糖相對(duì)含量為甘露糖和葡萄糖(20.4%:79.6%)；而AAP-80-Se的單糖種類及相對(duì)含量比為木糖、甘露糖和葡萄糖