茵陳蒿對(duì)肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠血清雌三醇、胎盤超微結(jié)構(gòu)及ER表達(dá)的影響.pdf

1、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是妊娠中晚期特有的并發(fā)癥，臨床上以皮膚瘙癢、黃疸為特征。該病主要對(duì)胎兒造成較大的危害，易弓l起自發(fā)性早產(chǎn)、孕期羊水胎糞污染、胎兒宮內(nèi)窘迫、胎死宮內(nèi)等不良預(yù)后，現(xiàn)在已被列入高危妊娠。本課題試圖從血清雌三醇(estriol，E3)、胎盤雌激素受體(estrogen receptor，ER)的表達(dá)和胎盤組織病理學(xué)改變等方面來研究茵陳蒿對(duì)I

2、CP的治療作用及其可能的作用機(jī)制。 第一部分肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠動(dòng)物模型的建立及單味茵陳蒿對(duì)肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠血清雌三醇的影響 [目的]探討雌、孕激素誘導(dǎo)的肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠血生化指標(biāo)、肝臟病理改變，為成功建立ICP大鼠模型提供生化和病理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。另外，探討中藥茵陳蒿的應(yīng)用對(duì)雌、孕激素誘導(dǎo)的肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠血清E3的影響。 [方法]采用苯甲酸雌二醇和黃體酮誘導(dǎo)妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥大鼠模型，將60只孕鼠隨機(jī)分為正常組、模

3、型組、茵陳蒿高、中、低劑量組和熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid，UDCA)組。各組孕鼠均于妊娠21天摘眼球法取全血，頸椎脫臼處死后正常組和模型組孕鼠取肝臟組織2塊常規(guī)制備肝臟組織光鏡、電鏡標(biāo)本。所有孕鼠檢測(cè)血清E3，正常組和模型組孕鼠還需檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、總膽酸值。 [結(jié)果]模型組的各項(xiàng)生化指標(biāo)水平升高，與正常組相比有極顯著性差異(P<0.01) 肝臟組織病理學(xué)研究顯示：光鏡下可見正常

4、組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，無變性與壞死；模型組部分肝細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞內(nèi)有空泡樣變性；肝竇間隙狹窄明顯；部分區(qū)域有少量肝細(xì)胞壞死。電鏡下可見正常組肝細(xì)胞、毛細(xì)膽管超微結(jié)構(gòu)無明顯改變；模型組可見毛細(xì)膽管擴(kuò)張，擴(kuò)張的毛細(xì)膽管中見微絨毛變少或消失，其中可見高電子致密物沉積，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)不同程度擴(kuò)張，線粒體腫脹，嵴斷裂或消失。 模型組血清E3的改變與正常組相比有顯著性差異(P<0.01)；茵陳蒿高、中劑量組和UDCA組血清E3的改變，與模型組相比

5、有顯著性差異(P<0.01，P<0.05)；茵陳蒿低劑量組與模型組相比，血清E3無顯著性差異(P>0.05)；茵陳蒿高劑量組血清E3與正常組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 [結(jié)論]肝臟組織病理觀察提示實(shí)驗(yàn)處理后孕鼠肝臟呈肝內(nèi)膽汁淤積，說明本實(shí)驗(yàn)已成功復(fù)制妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥動(dòng)物模型。茵陳蒿可能通過改善血清E3水平，而達(dá)到治療ICP的目的。 第二部分單味茵陳蒿對(duì)肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠胎盤ER表達(dá)的影響 [目的]通過檢

6、測(cè)各組孕鼠胎盤ER的表達(dá)，探討茵陳蒿的療效及其可能的作用機(jī)理。 [方法]孕鼠胎盤組織經(jīng)石蠟切片后采用免疫組化法檢測(cè)ER的表達(dá)。 [結(jié)果]模型組胎盤ER表達(dá)與正常組相比有顯著性差異(P＜0.01)，茵陳蒿低劑量組與模型組相比無顯著性差異(P＞0.05)，其他各治療組與模型組相比有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)；茵陳蒿高劑量組與正常組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，與UDCA組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。

7、 [結(jié)論]茵陳蒿能夠抑制IcP孕鼠胎盤ER的上調(diào)，提示茵陳蒿對(duì)于妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥孕鼠胎盤功能的改善有一定的效果，可能是通過調(diào)節(jié)胎盤ER的表達(dá)發(fā)揮其治療作用。 第三部分茵陳蒿對(duì)肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠胎盤病理改變的影響 [目的]通過觀察肝內(nèi)膽汁淤積孕鼠胎盤病理改變來探討茵陳蒿對(duì)于妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥的治療作用。 [方法]各組孕鼠于妊娠第21天頸椎脫臼處死后，剖宮取胎盤組織2塊常規(guī)制備胎盤組織光鏡、電鏡標(biāo)本。

8、 [結(jié)果]胎盤組織病理學(xué)研究顯示：光鏡下正常組胎盤絨毛無腫脹，絨毛內(nèi)毛細(xì)血管豐富，滋養(yǎng)層細(xì)胞無明顯增生。模型組絨毛腫脹，絨毛間隙狹窄，滋養(yǎng)層細(xì)胞增生，以合體滋養(yǎng)層細(xì)胞增生更為顯著，部分絨毛毛細(xì)血管空虛、塌陷。茵陳蒿高劑量組與正常組無顯著差異。茵陳蒿中劑量組和UDCA組絨毛腫脹，絨毛毛細(xì)血管病變較明顯，滋養(yǎng)層細(xì)胞增生不明顯。茵陳蒿低劑量組與模型組病理改變無顯著差異。電鏡下可見正常組合體滋養(yǎng)層細(xì)胞表面有大量的發(fā)育良好的微絨毛，毛細(xì)血管豐富

9、；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有豐富致密的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、大量線粒體及其它多胞體；細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則。模型組合體滋養(yǎng)層細(xì)胞表面微絨毛空泡樣變性，部分合體滋養(yǎng)層細(xì)胞微絨毛缺失，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張，線粒體腫脹，部分嵴斷裂；核不規(guī)則。茵陳蒿高劑量組合體滋養(yǎng)層細(xì)胞與正常組無顯著差異。茵陳蒿中劑量組和UDCA組合體滋養(yǎng)層細(xì)胞表面微絨毛空泡樣變性，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，線粒體腫脹，核不規(guī)則。茵陳蒿低劑量組合體滋養(yǎng)層細(xì)胞病理改變與模型組無顯著差