Slit2和P-selectin在轉(zhuǎn)基因鼠自發(fā)胰腺癌中的作用研究.pdf

1、腫瘤的產(chǎn)生和發(fā)展是一個由多種基因的表達變化和許多生理性調(diào)節(jié)共同作用的復雜過程。大量研究結果已經(jīng)證實:從正常細胞發(fā)生惡變，直到腫瘤形成的過程中其所在位置的微環(huán)境對這一過程的影響至關重要。即腫瘤組織周邊的基底膜的組織結構，血管和淋巴管系統(tǒng)，游離在組織間隙中的白細胞、淋巴細胞和血小板等諸多成員的生理功能對腫瘤病程的發(fā)展和腫瘤細胞病理過程的調(diào)節(jié)都會有巨大的影響。 遺傳工程小鼠模型（Genetically engineered mouse

2、, GEM）是當前用于人類疾病生物學研究的相對理想的模型，它有著其它疾病模型無法比擬的優(yōu)勢。其中，Rip1-Tag2自發(fā)形成胰島細胞瘤的轉(zhuǎn)基因小鼠模型是用以研究腫瘤的經(jīng)典動物模型。首先，腫瘤在小鼠器官內(nèi)的形成是自然發(fā)生的，腫瘤的自然生長率和轉(zhuǎn)移特性與人類相似；其次，該模型的病例進程已經(jīng)得到了充分的研究,為研究其他外加因素對自發(fā)胰腺瘤的影響提供了良好的對照；再次，在Rip1－Tag2小鼠身上可以進行進一步的基因操作?？梢酝ㄟ^雜交得到帶有其

3、他基因缺陷或過表達其他基因的小鼠。這為從整體動物水平來研究各種基因?qū)δ[瘤生長及轉(zhuǎn)移的影響和機制提供了一個良好的平臺。 神經(jīng)導向因子Slit2作為促腫瘤血管生成因子來調(diào)節(jié)體內(nèi)腫瘤生長的現(xiàn)象在裸鼠移植瘤模型中已經(jīng)得到證實，但是裸鼠移植瘤模型是“人為”所形成，不能精確地模擬體內(nèi)腫瘤的生物學特性。而細胞粘連分子P-selectin缺失后抑制體內(nèi)腫瘤生長的現(xiàn)象也已經(jīng)在裸鼠移植腫瘤模型中被發(fā)現(xiàn)，但是其機制尚未得到研究，而且同樣存在模型上的

4、缺陷。本研究以Rip1-Tag2轉(zhuǎn)基因鼠模型為研究載體，探索這兩種基因——Slit2和P-selectin對腫瘤微環(huán)境的調(diào)節(jié)功能，從而探討其影響胰腺瘤的發(fā)生、生長及轉(zhuǎn)移的病理過程的機制。主要研究方法和結果如下： 1、 Slit2基因的過表達對原發(fā)性胰島細胞瘤發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移的影響首先將Rip1-Tag2小鼠和Slit2過表達小鼠雜交，建立Slit2/Rip1-Tag2遺傳工程小鼠腫瘤模型。以普通Rip1-Tag2小鼠為實驗對照。

5、通過對兩組小鼠血性胰島的發(fā)生數(shù)目，胰腺腫瘤的發(fā)生數(shù)目以及胰腺腫瘤體積的比較分析，證實Slit2分子的過表達促進了機體自發(fā)胰腺腫瘤的發(fā)生和生長；通過BrdU細胞增殖檢測實驗，證實slit2分子的過表達促進了腫瘤細胞的增殖程度；通過血管塑形證實slit2分子的過表達增加了腫瘤新生血管的密度。而通過對兩組小鼠外周血及腫瘤周邊白細胞計數(shù)的比較分析，發(fā)現(xiàn)Slit2/Robo1信號并沒有影響到轉(zhuǎn)基因鼠體內(nèi)白細胞的遷移行為，因而可以排除白細胞對腫瘤的

6、影響作用。同時，通過對Slit2/Rip1-Tag2小鼠腫瘤病程的觀察，發(fā)現(xiàn)在病程晚期，腫瘤轉(zhuǎn)移至腸系膜，并且轉(zhuǎn)移率高達25％，而普通Rip1-Tag2小鼠轉(zhuǎn)移率＜0.02％；對兩組小鼠的胰腺腫瘤及淋巴結進行淋巴內(nèi)皮的LYVE-1和Prox－1染色，經(jīng)比較分析發(fā)現(xiàn)slit2過表達促進了淋巴管的增生；而對Slit2/Rip1-Tag2小鼠血管分布密集的器官進行H－E染色，未發(fā)現(xiàn)有腫瘤轉(zhuǎn)移灶。 2、 P-selectin基因的缺失

7、對原發(fā)性胰島細胞瘤發(fā)生、生長和轉(zhuǎn)移的影響首先將Rip1-Tag2小鼠和P-selectin敲除小鼠雜交，建立P-selectin KO/Rip1-Tag2遺傳工程小鼠腫瘤模型。以普通Rip1-Tag2小鼠為實驗對照。通過對兩組小鼠血性胰島的發(fā)生數(shù)目，胰腺腫瘤的發(fā)生數(shù)目以及胰腺腫瘤體積的比較分析，證實P-selectin的缺失抑制了機體自發(fā)胰腺腫瘤的發(fā)生和生長；通過BrdU細胞增殖檢測實驗，證實P-selectin分子的缺失抑制了腫瘤細胞

8、的增殖程度；通過血管內(nèi)皮的特異性染色發(fā)現(xiàn)P-selectin分子的缺失減少了腫瘤新生血管的密度；通過血小板的CD41染色發(fā)現(xiàn)P-selectin分子的缺失抑制了血小板血栓的形成。而通過對兩組小鼠外周血及腫瘤周邊白細胞計數(shù)的比較分析，發(fā)現(xiàn)在此腫瘤模型中，P-selectin的缺失并未影響外周血中白細胞的密度，而腫瘤組織周邊游離白細胞數(shù)目顯著減少，即機體對腫瘤的細胞免疫反應削弱了。然而腫瘤的總體進程依然呈現(xiàn)出延緩的趨勢。 結