IMDC負載P2-,58-73-肽段干預對EAN中Th17-Th1細胞的影響.pdf

1、目的：觀察Thl7型細胞因子IL-17、Th17細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγT及Th1型細胞因子IFN-γ mRNA在P253-78肽段誘導的Lewis大鼠實驗性自身免疫性神經(jīng)炎(EAN)模型發(fā)病高峰期脾臟、淋巴結(jié)和坐骨神經(jīng)中的表達，采用負載P258-73肽段的iMDC(P258-73aa-iMDC)進行干預，研究P258-73aa-iMDC對Th17/Th1細胞的影響，探討P2ss-Tsaa-iMDC在誘導EAN抗原特異性的免疫耐受中的

2、相關(guān)機制。 方法： 1.體外應用GM-CSF聯(lián)合IL-10誘導骨髓來源DC前體細胞分化和擴增，培養(yǎng)第6天收集iMDC，以50μg/ml P258-73肽段負載于iMDC，獲得負載P258-73肽段的iMDC(P258-73aa-iMDC)。 2.28只清潔級Lewis大鼠，隨機分為佐劑對照組、致病組、iMDC干預組和P258-73aa-iMDC干預組，每組7只。致病組用P253-78和完全弗氏佐劑免疫Lewis大

3、鼠制成EAN動物模型。佐劑對照組只注射完全弗氏佐劑作為致病組的對照。iMDC干預組在免疫前皮下注射iMDC。P258-73aa-iMDC干預組在免疫前皮下注射P258-73aa-iMDC。觀察實驗動物的發(fā)病情況并按評分標準做EAN嚴重性的臨床評估，于發(fā)病高峰期結(jié)束觀察。 3.實驗終止時以3H-TdR摻入法檢測淋巴細胞增殖反應。對坐骨神經(jīng)進行病理學檢查。用RT-PCR技術(shù)檢測脾臟、淋巴結(jié)和坐骨神經(jīng)中IL-17、RORγt IFN-

4、γ mRNA的表達。 結(jié)果： 1.樹突狀細胞的體外培養(yǎng)培養(yǎng)6天的DC，流式細胞儀表型分析示CD11c+(66.13％±10.81％)、MHC-IIlow(40.03％±7.33％)CD80low(24.72％+4.13％)、和CD86low(18.6l％±3.68％)，證實所培養(yǎng)的細胞是iMDC。 2.動物模型： P258-73aa-iMDC干預組的臨床癥狀較致病組明顯減輕。 與致病組比較，P25

5、8-73aa-iMDC干預組的抗原特異性淋巴細胞增殖反應顯著降低(P<0.01)。 P258-73aa-iMDC干預組的坐骨神經(jīng)的炎性細胞浸潤和脫髓鞘改變較致病組明顯減輕。 3.IL-17、RORγt和IFNγ mRNA的表達與佐劑對照組比較，致病組、iMDC干預組和P258-73aa-iMDC干預組的IL-17、IFN-γ mRNA在脾臟、淋巴結(jié)和坐骨神經(jīng)中的表達均顯著升高(P<0.01)；與致病組比較，P258-73

6、aa-iMDC干預組顯著降低(P<0.01)。 脾臟和淋巴結(jié)中的RORγt mRNA在各組的表達差異大致同IL-17和IFN-γ，但坐骨神經(jīng)中，RORγt mRNA幾乎無表達。 結(jié)論： 1.IL-17、RORγt和IFN-γ表達上調(diào)可能促進EAN發(fā)病。 2.Th17/Th1細胞可能協(xié)同誘導EAN的發(fā)生與發(fā)展。 3.P258-73aa-iMDC通過抗原特異性地抑制Th17/Th1細胞而減輕EAN的發(fā)