IFN-γ及IL-33在EAN中的表達(dá)及P2-,58-73aa--iMDC干預(yù)對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、吉蘭-巴雷綜合癥(Guillain-Barré syndrome，GBS)，是一種自身免疫性疾病，是由于某些組分與周?chē)窠?jīng)組分相似的病原體入侵機(jī)體，機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)生錯(cuò)誤識(shí)別，產(chǎn)生自身免疫性T細(xì)胞和自身抗體，并針對(duì)周?chē)窠?jīng)組分發(fā)生免疫應(yīng)答，引起周?chē)窠?jīng)髓鞘缺失。但具體的發(fā)病機(jī)制尚未充分闡明。 目前，GBS的主要治療方法包括血漿置換(plasma exchange，PE)和免疫球蛋白靜脈滴注(intravenous immunogl

2、obulin，IVIG)。但臨床實(shí)踐表明這兩種治療方法只對(duì)1/3的病人有效、可能引起過(guò)敏反應(yīng)、多種副作用甚至嚴(yán)重的并發(fā)癥，而且費(fèi)用昂貴，因而臨床應(yīng)用受限。皮質(zhì)類(lèi)固醇則認(rèn)為對(duì)GBS無(wú)效，并有不良反應(yīng)，現(xiàn)已不主張使用［5，6］。 GBS理想的預(yù)防及治療方法應(yīng)該是抑制抗原特異性的免疫反應(yīng)，建立抗原特異性的免疫耐受的同時(shí)完整的保留其余的免疫應(yīng)答能力，對(duì)其它的任何免疫應(yīng)答都不造成干擾。 在本試驗(yàn)中，我們?cè)贓AN模型誘導(dǎo)前給lewi

3、s大鼠皮下注射P258-73aa-iMDC，觀察EAN大鼠的發(fā)病情況和并進(jìn)行相應(yīng)的臨床評(píng)分，觀察大鼠坐骨神經(jīng)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況及髓鞘脫失情況，檢測(cè)淋巴細(xì)胞抗原特異性增殖反應(yīng)，檢測(cè)IFN-γ和IL-33 mRNA的表達(dá)，從T細(xì)胞極化等方面探討P258-73aa-iMDC干預(yù)對(duì)EAN的影響及其作用機(jī)制，以期為臨床GBS抗原特異性防治提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 初步探討P258-73aa-iMDC對(duì)的干預(yù)效果及IFN-γ及IL-33在EAN發(fā)

4、病機(jī)制中可能起到的作用 方法: 1.隨機(jī)分組為四組：CFA對(duì)照組(A組)-第-7天背部皮下注射1mlPBS，第0天雙后肢足墊皮內(nèi)注射200μl CFA乳劑；EAN組(B組)-第-7天背部皮下注射1ml 0.1M PBS，第0天雙后肢足墊皮內(nèi)注射200μl抗原乳劑；iMDC組(C組)-第-7天背部皮下注射含3×106個(gè)/ml iMDC的PBS 1ml，第0天雙后肢足墊皮內(nèi)注射200μl抗原乳劑；P258-73aa-iMDC

5、組(D組)-第-7天背部皮下注射含3×106個(gè)/ml P258-73aa-iMDC的PBS1ml，第0天雙后肢足墊皮內(nèi)注射200μl抗原乳劑。 2.取大鼠骨髓干細(xì)胞培養(yǎng)髓源未成熟DC及用P258-73aa負(fù)載未成熟的DC。 3.制作EAN模型：以近交系SPF級(jí)Lewis大鼠為動(dòng)物模型對(duì)象，雙后肢足墊皮內(nèi)注射200μl抗原乳劑(由含100μgP253-78aa的100μl 0.1MPBS和100μl CFA用針式勻漿器混勻

6、成油包水乳劑)一次，免疫均在腹腔注射10％水合氯醛(0.3-0.4mg/100g)后數(shù)分鐘，麻醉滿意時(shí)進(jìn)行。 4.結(jié)束臨床觀察時(shí)，分別取雙側(cè)坐骨神經(jīng)組織、淋巴組織，脾組織待下步處理。 5.取坐骨神經(jīng)根制作石蠟切片，行HE染色并于光鏡下觀察。 6.取部分引流淋巴結(jié)行淋巴細(xì)胞抗原特異性增殖反應(yīng)。 7.RT-PCR法半定量分別檢測(cè)四組大鼠坐骨神經(jīng)組織、脾組織及淋巴組織IFN-γ和IL-33 mRNA的表達(dá)量。

7、 結(jié)果: 1.與EAN組相比，P258-73aa-iMDC組大鼠的臨床表現(xiàn)均明顯減輕。 2.與EAN組相比，P258-73aa-iMDC組大鼠的坐骨神經(jīng)組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況及脫髓鞘情況明顯好轉(zhuǎn)。 3.與EAN組相比，在淋巴細(xì)胞體外增殖反應(yīng)中，P258-73aa-iMDC可抑制抗原特異性T細(xì)胞增殖(p<0.01)。 4.與EAN組相比，P258-73aa-iMDC組大鼠高峰期IFN-γ mRNA的表達(dá)