異丙托溴銨對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠鼻黏膜Th1、Th2、Th17及Treg細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　異丙托溴銨作為抗膽堿藥的一種，能夠抑制鼻腔內(nèi)的副交感神經(jīng)纖維，臨床上，可用來控制變應(yīng)性鼻炎的鼻部癥狀的發(fā)作。關(guān)于異丙托溴銨在改善變應(yīng)性鼻炎癥狀同時(shí)，能否對(duì)機(jī)體細(xì)胞和體液免疫產(chǎn)生影響，這方面國內(nèi)外鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建AR動(dòng)物模型，探討抗膽堿藥對(duì)AR動(dòng)物模型鼻腔局部免疫環(huán)境的影響，為抗膽堿藥的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　選用32只5-6周齡BALB/c雌性小鼠，隨機(jī)分為:16只用于變應(yīng)性鼻炎模型

2、的建立，另16只用于對(duì)照。致敏方法:采用經(jīng)典的OVA致敏法構(gòu)建變應(yīng)性鼻炎模型，分別在第0天、第5天通過腹腔注射予以基礎(chǔ)致敏，再從第12天起用OVA進(jìn)行連續(xù)7天的滴鼻激發(fā)，之后再次使用OVA予以間天長期緩慢滴鼻刺激10周，其余各組使用生理鹽水代替。整個(gè)建模過程長達(dá)4月余，以模擬變應(yīng)性鼻炎發(fā)病的慢性過程。11只小鼠建模成功后，隨機(jī)分為模型組（5只）和模型治療組（6只），對(duì)照組也分為對(duì)照空白組（8只），對(duì)照治療組（8只）。模型治療組和對(duì)照治療

3、組小鼠即開始予以3mg/ml異丙托溴銨20μl每側(cè)鼻腔滴鼻治療，持續(xù)給藥4周，同時(shí)模型組與對(duì)照組用等量生理鹽水代替異丙托溴銨滴鼻，在治療期間，模型治療組和模型組均繼續(xù)予以3％OVA溶液10μl每側(cè)鼻腔間天滴鼻刺激。治療結(jié)束后，取小鼠鼻粘膜，通過HE染色進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察對(duì)比。由于小鼠死亡等原因，最后用于分析的樣本數(shù)分別為對(duì)照組5只，模型組3只，模型治療組5只，對(duì)照治療組5只。采用Westernblot法檢測(cè)各組小鼠IL-4、IL-17、

4、IFN-γ、Foxp3蛋白含量，同時(shí)還用RT-PCR法檢測(cè)IL-4、IL-17 mRNA含量。
　　結(jié)果:
　　治療前，模型治療組、模型組行為評(píng)分均達(dá)到或超過變應(yīng)性鼻炎模型評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，建模成功。治療后，模型治療組行為評(píng)分低于模型組(P＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，在變應(yīng)性鼻炎小鼠模型中，鼻粘膜IL-4及IL-17的表達(dá)顯著升高(P＜0.05)，IFN-γ和Foxp3蛋白表達(dá)也略有升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義(P＞0.05)。變應(yīng)性鼻炎模型經(jīng)異丙托溴銨局部治療后，IL-4表達(dá)有顯著下降(P＜0.05)，而Foxp3表達(dá)有升高趨勢(shì)，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，而IFN-γ及IL-17細(xì)胞因子表達(dá)沒有明顯變化(p＞0.05)。對(duì)照組經(jīng)異丙托溴銨治療后，鼻粘膜局部的IL-4、IL-17、Foxp3的表達(dá)有升高趨勢(shì)。RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，變應(yīng)性鼻炎小鼠的IL-4及IL-17的mRNA表達(dá)有升高(p＜0.05)，經(jīng)異丙托溴銨治

6、療后，IL-4表達(dá)有下降趨勢(shì)(p＜0.05)，與Western blot結(jié)果一致;而IL-17表達(dá)也有顯著下降(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1）通過蛋白質(zhì)雜交及定量RT-PCR分析顯示，變應(yīng)性鼻炎小鼠模型的鼻粘膜中存在Th2細(xì)胞優(yōu)勢(shì)為主的免疫失衡，同時(shí)IL-17表達(dá)也顯著升高。
　　2）異丙托溴銨在改善變應(yīng)性鼻炎癥狀的同時(shí)，能降低鼻粘膜中Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-4，并增強(qiáng)Treg細(xì)胞的Foxp3的產(chǎn)生，但沒