PTEN蛋白在大鼠腹主動(dòng)脈球囊損傷后的表達(dá)研究.pdf

1、目的：研究PTEN蛋白(phosphotase and tensin homolog deleted onchromosome ten)在大鼠腹主動(dòng)脈球囊損傷后動(dòng)態(tài)表達(dá)及其在內(nèi)膜增生中的作用；探討其對內(nèi)膜增生作用的可能機(jī)制。 方法：雄性SD大鼠56只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(8只)、單純球囊損傷組(48只，包括1天、4天、7天、14天、21天、28天組)，建立大鼠腹主動(dòng)脈球囊損傷模型。各組分別于術(shù)后28、1、4、7、14、21、28天

2、手術(shù)切取損傷腹主動(dòng)脈作為實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本。進(jìn)行下列檢測：(1)行HE及Verhoeff彈力纖維染色，光鏡下觀察血.管內(nèi)膜增生情況，并在計(jì)算機(jī)圖像分析儀下測量、分析血管內(nèi)膜厚度；(2)應(yīng)用PTEN多克隆抗體SABC法免疫組化染色，400x光鏡下觀察，并計(jì)算陽性細(xì)胞百分比，觀察術(shù)后不同時(shí)間PTEN蛋白表達(dá)情況。同法應(yīng)用PCNA單克隆抗體SP法免疫組化染色，計(jì)算陽性細(xì)胞百分比，表示VSMC增殖程度。觀察PTEN與PCNA表達(dá)變化的關(guān)系。(3) We

3、stem blotting檢測：分析PTEN蛋白的表達(dá)情況，觀察其動(dòng)態(tài)變化。所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS12.0.1統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料結(jié)果以x±s表示，采用單因素方差分析( one-way ANOVA)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：正下常動(dòng)脈管壁較薄，球囊損傷后血管內(nèi)膜開始增生，第28天內(nèi)膜與中膜(Intima/Media.I/M)厚度比值最高(2.26±0.38 vs control0.02±0.005，P<0.01)。免疫

4、組化染色結(jié)果顯示正常動(dòng)脈有PTEN陽性細(xì)胞表達(dá)；術(shù)后動(dòng)脈中PTEN陽性細(xì)胞迅速減少，7天陽性細(xì)胞數(shù)開始增加，14天達(dá)到高峰，約為正下常水平的2倍，21天仍維持在較高水平，28天有所下降。4～7天PCNA陽性細(xì)胞百分比持續(xù)增高，7天達(dá)到高峰后表達(dá)下降，28天只有少量表達(dá)。PTEN蛋白western blotting檢測結(jié)果與免疫組化檢測結(jié)果基本一致。對比球囊損傷動(dòng)脈中PTEN與PCNA的表達(dá)情況，內(nèi)膜增生加劇時(shí)伴PCNA的表達(dá)增加，此時(shí)P