Skp2在大鼠主動脈損傷后的表達及其與內膜增生的關系研究.pdf

1、[目的]
　　 研究Skp2在大鼠主動脈球囊損傷后動態(tài)表達及其與血管平滑肌細胞(VSMC)增殖的關系，并探討其對內膜增生作用的可能機制，為Skp2作為治療血管成形術后再狹窄的新靶點提供理論基礎。
　　 [方法]
　　 健康SD雄性大鼠56只，隨機分為假手術組(8只)和單純球囊損傷組(48只，包括2d、4d、7d、10d、14d、28d組)。2F Fogarty導管造成大鼠主動脈損傷，建立動物模型。各組分別于術后2

2、、4、7、10、14、28天手術切取損傷主動脈作為實驗標本。分別進行下列檢測：(1)血管形態(tài)學檢測：病理切片HE染色，光鏡下觀察血管內膜增生情況，并在計算機圖像分析儀下測量、分析血管內膜面積；(2)SP染色法免疫組織化學檢測PCNA、Skp2、p27Kipl表達。高倍光鏡下觀察并計算陽性細胞百分比，觀察術后不同時間Skp2、p27Kipl與PCNA表達變化的關系。(3)Real Time RT-PCR檢測各組Skp2和p27Kipl在m

3、RNA水平的表達情況。(4)Western blotting檢測各組Skp2和p27Kipl蛋白表達情況，觀察其動態(tài)變化。
　　 [結果]
　　 1.球囊損傷后血管內膜開始增生，血管內膜面積與中膜面積(IA/MA)比值隨著時間的推移逐漸升高，28天達到高峰(與假手術組比較，P<0.01)。
　　 2.免疫組化染色結果顯示：(1)正常動脈幾乎無PCNA陽性細胞表達，損傷術后2天開始出現PCNA陽性的VSMC細胞表達

4、，并逐漸增多，至7天時達到高峰，此后表達逐漸下降，28天時內膜僅有少量表達，但仍高于正常水平(P<0.05)。(2)在正常動脈中Skp2陽性表達極低，術后2天表達開始升高，至10天時達高峰，術后14天迅速回落，28天降至最低，但仍高于正常水平(P<0.05)。(3)正常動脈中p27Kipl陽性細胞表達明顯，術后2天明顯下降，4天至7天表達仍較低，10天時p27Kipl陽性細胞表達迅速增加(P<0.05)，且以內膜為主。14天和28天維持

5、在較高水平，與10天組相比，無顯著性差異(P>0.05)。(4)Skp2和PCNA表達呈明顯正相關(r=0.892，P<0.01)。
　　 3.Real Time RT-PCR和Western blotting結果顯示正常動脈Skp2 mRNA和蛋白表達極低，術后2天Skp2 mRNA和蛋白表達開始升高，至10天時達到高峰(P<0.01)。14天后Skp2 mRNA和蛋白表達量開始下降，至28天進一步下降，但仍明顯高于假手術組(

6、P<0.05)。p27Kipl mRNA和蛋白在正常動脈中可見表達，術后4天p27Kipl mRNA和蛋白表達明顯減少(P<0.05)。7天至10天時p27Kipl mRNA表達仍較低，14天p27Kipl mRNA表達明顯升高，至28天時p27Kipl mRNA恢復至正常水平(P>0.05)。而p27Kipl蛋白于術后7天時表達已開始升高，至28天時達到高峰(P<0.05)。
　　 [結論]
　　 1.球囊損傷后動脈出