兔腹主動(dòng)脈球囊損傷后IL-8對VSMCs增殖的影響.pdf

1、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)(percutaneous transluminal coronaryangioplasty，PTCA)是治療冠心病安全、有效的方法，但術(shù)后3～6個(gè)月再狹窄發(fā)生率達(dá)30％～50％，嚴(yán)重影響其遠(yuǎn)期療效。再狹窄的發(fā)生機(jī)制至今尚未完全闡明。目前，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為血管平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜下遷移并過度增殖是其關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，因此血管平滑肌細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)成為研究的焦點(diǎn)。一些研究資料顯示球囊損傷后血管再狹窄與血管彈性回縮、血栓的形成和機(jī)

2、化，血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)過度增殖及細(xì)胞外基質(zhì)的聚集等有關(guān)。其中VSMCs的過度增殖可能是再狹窄形成的主要原因，對血管進(jìn)行球囊擴(kuò)張后，血管內(nèi)皮和中膜平滑肌細(xì)胞受到牽拉、損傷，在修復(fù)過程中在一系列生長因子的刺激作用下，VSMCs過度增殖、并向內(nèi)膜方向遷移。因而抑制VSMCs過度增殖以防治再狹窄成為廣大醫(yī)務(wù)工作者關(guān)注和研究的課題。
　　 白細(xì)胞介素-8(Interleukin-8，IL-8)是趨化因子CXC亞家族的一員，主要由

3、單核細(xì)胞產(chǎn)生，其主要生理活性是趨化和激活中性粒細(xì)胞并分泌大量的黏附分子，使中性粒細(xì)胞表面CD11b/CD18受體上調(diào)。IL-8可以誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，是一個(gè)促血管生成因子，在炎癥反應(yīng)過程中起著重要的作用。IL-8能促使單核細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞上的滾動(dòng)轉(zhuǎn)變成強(qiáng)有力的黏附。研究發(fā)現(xiàn)，升高的IL-8水平與冠狀動(dòng)脈疾病的發(fā)病有關(guān)，并且可以作為心臟事件的預(yù)測因子。
　　 目的：本研究通過球囊擴(kuò)張拉傷兔腹主動(dòng)脈，建立動(dòng)脈再狹窄模型，造影檢

4、查腹主動(dòng)脈管腔狹窄變化情況，采用組織病理觀察血管球囊擴(kuò)張術(shù)后內(nèi)膜和中層平滑肌的結(jié)構(gòu)改變，利用免疫組化技術(shù)觀察IL-8蛋白陽性表達(dá)和PCNA陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)，研究IL-8對血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)增殖的影響，為防治PCI術(shù)后再狹窄提供可靠的理論依據(jù)。
　　 方法：選擇雄性新西蘭大白兔24只為實(shí)驗(yàn)對象，體重2.50-3.25kg，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(experimentgroup)、治療組(

5、treatmentgroup)和假手術(shù)組(shamgroup)，每組各8只動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)組和治療組動(dòng)物通過穿刺股動(dòng)脈，送入球囊拉傷腹主動(dòng)脈。治療組動(dòng)物通過耳緣靜脈注射IL-8單克隆抗體進(jìn)行干預(yù)。假手術(shù)組動(dòng)物只進(jìn)行股動(dòng)脈穿刺和留置鞘管，不進(jìn)行球囊擴(kuò)張拉傷。
　　 1.分別于實(shí)驗(yàn)前，實(shí)驗(yàn)后4小時(shí)、1天、3天，1周、2周、4周，耳緣靜脈采血4ml，檢測三組動(dòng)物血清IL-8水平。
　　 2.術(shù)后4周時(shí)處死動(dòng)物進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，應(yīng)用

6、光學(xué)顯微鏡和計(jì)算機(jī)病理圖象分析系統(tǒng)分析測定以下指標(biāo)：內(nèi)膜中膜厚度、面積，計(jì)算血管狹窄程度[（鄰近正常血管管徑-狹窄段最小管徑）/鄰近正常血管管徑]。
　　 3.利用免疫組化染色技術(shù)觀察IL-8蛋白表達(dá)情況，增殖細(xì)胞核抗原PCNA染色分析后，用光學(xué)顯微鏡和計(jì)算機(jī)病理圖象分析系統(tǒng)測定每40倍視野中PCNA陽性細(xì)胞比例，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)和陽性細(xì)胞百分率。
　　 結(jié)果：
　　 1.三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間體重、月齡、血脂等一般情況

7、比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 2.術(shù)前IL-8水平比較，實(shí)驗(yàn)組、治療組、假手術(shù)組三組之間無明顯差異，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物球囊損傷4小時(shí)后IL-8水平即開始升高，術(shù)后1d達(dá)到峰值，持續(xù)增高4周，且明顯高于治療組和假手術(shù)組。治療組和假手術(shù)組動(dòng)物IL-8水平無上述變化規(guī)律。
　　 3.實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物腹主動(dòng)脈明顯狹窄，組織學(xué)檢查內(nèi)膜面積和中膜面積、血管狹窄程度等指標(biāo)大于治療組和假手術(shù)組（P＜0.01），治療組管腔有所狹窄，假

8、手術(shù)組動(dòng)物管腔無明顯變化，治療組與假手術(shù)組無顯著性差異(P＞0.05)。相關(guān)分析顯示，IL-8水平與內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜面積、中膜厚度、中膜面積等呈正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r分別為0.905，0.897，0.852，0.846，P均＜0.01）。
　　 4.免疫組化顯示，實(shí)驗(yàn)組與治療組和假手術(shù)組比較，IL-8蛋白陽性表達(dá)明顯升高（P＜0.05），治療組高于假手術(shù)組，無明顯差異。PCNA陽性細(xì)胞比例比較，實(shí)驗(yàn)組明顯高于治療組與假手術(shù)組（P＜0.

9、05），治療組明顯高于假手術(shù)組（P＜0.05）。相關(guān)分析顯示IL-8陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)與PCNA陽性細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.857（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過介入方法進(jìn)行球囊拉傷可成功建立兔腹主動(dòng)再狹窄動(dòng)物模型。
　　 2.腹主動(dòng)脈球囊損傷后IL-8水平高表達(dá)，血管明顯狹窄，經(jīng)IL-8單克隆抗體治療后，動(dòng)脈狹窄程度明顯減輕。IL-8水平與動(dòng)脈狹窄程度呈正相關(guān)。
　　 3.球囊損傷引