血管緊張素-(1-7)改善兔腹主動脈球囊損傷術后血管重塑的作用及機制研究.pdf

1、背景及目的:
　　 目前經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術和支架置入術作為冠心病現(xiàn)代治療的重要手段，顯得越來越重要。然而冠狀動脈介入術后6個月內(nèi)再狹窄的發(fā)生率相當高[1]。盡管藥物涂層支架的出現(xiàn)已大大降低了再狹窄率[2]，但近年來研究發(fā)現(xiàn)其可致支架內(nèi)血栓形成增加[3]，且費用昂貴，使其應用仍有一定局限性，故防治介入術后再狹窄的研究仍然是介入心臟病學研究的焦點之一。
　　 冠脈介入術后血管再狹窄的機制十分復雜，包括血管的彈性回縮、負性

2、重塑、血栓形成并機化、血管平滑肌細胞(VSMC)過度增生、細胞外基質(ECM)聚集、炎癥反應等[4]。近年來認為，血管重塑是導致血管再狹窄的重要因素之一。已證實，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)，尤其是血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)通過作用于AT1受體，在血管介入術后血管重塑的病理過程中發(fā)揮了重要的作用，其中包括促進VSMC的過度增殖、分化與遷移，以及ECM，主要是膠原蛋白等合成的失控[5]。而對RAS系統(tǒng)的干預，如血管緊張素轉化酶抑制劑(AC

3、EI)和血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)在冠心病患者中的應用，被證實安全而有效，明顯改善了冠心病患者的預后[6，7]，提示我們以RAS系統(tǒng)為靶點可能提供改善球囊成形術后血管重塑的治療方法。
　　 血管緊張素-(1-7)[ANG-(1-7)]是RAS中的一員，具有舒張血管、降低血壓、利尿、抑制心肌細胞肥大、抑制VSMC和心臟成纖維細胞增殖等與ANGⅡ相拮抗的作用[8]。據(jù)報道ACEI可減少ANGⅡ的生成，并使循環(huán)ANG-(1-7)

4、增加，故推測ACEI的作用可能部分與ANG-(1-7)增加有關。Strawn等[9]對球囊損傷頸動脈的SD大鼠模型連續(xù)靜滴ANG-(1-7)12天，發(fā)現(xiàn)ANG-(1-7)能明顯減少VSMC中的DNA合成和減輕血管內(nèi)膜的增殖。Langevld等[10]也報道了ANG-(1-7)能明顯減輕大鼠頸動脈支架置入后的再狹窄。此后關于ANG-(1-7)減輕血管介入術后再狹窄的進一步研究相當少，其對血管損傷后血管重塑相關機制的在體研究暫未見報導。

5、r>　　 轉化生長因子β1(TGF-β1)是目前所知的致纖維化作用最強的細胞因子[11]。國外Iwata等[12]發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)的大鼠心臟成纖維細胞中加入ANG-(1-7)可降低TGF-β1的mRNA表達。Grobe等[13]也發(fā)現(xiàn)ANG-(1-7)在改善心室重塑的同時能明顯降低血漿中TGF-β1的水平。這些結果表明，ANG-(1-7)抑制纖維化的機制可能與抑制TGF-β1及其下游機制有關。
　　 本研究通過建立兔腹主動脈球囊損傷

6、模型，觀察ANG-(1-7)對球囊損傷后血管腔內(nèi)徑、內(nèi)膜厚度、新生內(nèi)膜面積、血管外膜膠原沉積和血管壁膠原合成等血管重塑指標的影響，了解ANG-(1-7)對介入術后血管重塑的作用，并進一步探討此作用是否與影響循環(huán)中ANGⅡ濃度和組織中TGF-β1的表達水平及其下游Smads或p38MAPK途徑的激活有關。
　　 方法：
　　 健康新西蘭白兔32只，隨機分成4組：假手術組、模型組、ANG-(1-7)組和ANG-(1-7)+A

7、-779組，建立腹主動脈球囊損傷模型，術后即刻分別通過微泵持續(xù)靜脈給予生理鹽水(2.5μl·h-1)、ANG-(1-7)(576μg·kg-1·d-1)或ANG-(1-7)+A-779(576μg·kg-1·d-1)4周。4周后采血分離血漿行酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定ANGⅡ濃度、行腹主動脈造影測定管腔內(nèi)徑，并取腹主動脈，部分組織用于提取RNA和蛋白，用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)方法檢測Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白mRNA表達水

8、平，用蛋白質印跡(western blot)方法檢測TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p38、p-p38蛋白表達水平；另一部分組織用于石蠟包埋和切片，行HE染色、Masson's染色和免疫組織化學，測定血管內(nèi)膜和中膜厚度、新生內(nèi)膜面積、管腔狹窄率，觀察血管外膜膠原沉積和血管壁中膠原與彈力纖維交聯(lián)情況，以及檢測Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白血管壁的沉積情況。
　　 結果：
　　 1.ANG-(1-7)對兔心率、血壓的影響

9、>　　 各組術前及術后4周的平均動脈壓和心率無明顯變化(P＞0.05)，組間比較也無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2.腹主動脈造影結果
　　 腹主動脈造影顯示，模型組和ANG-(1-7)+A-779組在球囊損傷術后4周管腔內(nèi)徑較假手術組均出現(xiàn)明顯變小[(2.88±0.08)mm和(3.34±0.11)mm vs.(3.85±0.03)mm，P＜0.01]。而ANG-(1-7)組管腔內(nèi)徑與假手術組比較差異無統(tǒng)計學意義

10、[(4.11±0.10)mm vs.(3.85±0.03)mm，P＞0.05]，與模型組比較，管腔內(nèi)徑明顯增大(P＜0.01)，聯(lián)合應用其特異性受體拮抗劑A-779時，管腔內(nèi)徑仍較模型組有所增大，兩組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但聯(lián)合應用A-779較單用ANG-(1-7)時的管腔內(nèi)徑仍有所減少，兩組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3.ANG-(1-7)對血管新生內(nèi)膜面積、內(nèi)膜和中膜厚度、管腔狹窄率的影響術后4周，

11、與模型組相比，ANG-(1-7)組和ANG-(1-7)+A-779組血管新生內(nèi)膜面積[(0.27±0.09)mm2和(0.38±0.01)mm2 vs(0.41±0.02)mm2，P＜0.05]，內(nèi)膜厚度[(208±17)μm和(407±25)μm vs.(448±15)μm，P＜0.05]和管腔狹窄率[(28.1±2.7)％和(36.8±2.2)％ vs.(40.1±2.7)％，P＜0.05]均顯著減少，ANG-(1-7)+A-779

12、組與ANG-(1-7)組間也存在顯著差異(P＜0.05)。而中膜厚度各組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 4.血管壁Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達水平
　　 術后4周，免疫組化病理切片可見Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白在損傷后的血管壁中大量沉積。RT-PCR結果提示，與假手術組比較，模型組、ANG-(1-7)組和ANG-(1-7)+A-779組血管壁組織中Ⅰ型[(38.5±2.1)％，(21.9±3.6)％和(35.4±5.9)

13、％ vs.(16.3±1.5)％，P＜0.01]和Ⅲ型膠原[(173.8±11.6)％，(113.3±5.5)％和(166.3±9.7)％ vs.(44.3±4.6)％，P＜0.01]mRNA的表達水平明顯升高，但ANG-(1-7)組升高的程度明顯低于模型組(P＜0.01)，ANG-(1-7)+A-779組與模型組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 5.血管壁TGF-β1、Smad2、p-Smad、p38、p-p38

14、的表達水平
　　 術后4周，與假手術組相比，模型組、ANG-(1-7)組和ANG-(1-7)+A-779組血管壁組織中TGF-β1的蛋白表達水平[(167.3±8.1)％，(131.8±6.7)％和(164.5±8.8)％ vs.(108.9±5.2)％，P＜0.05]和p-Smad2的相對活性[(43.1±2.1)％，(31.1±1.6)％和(41.7±2.2)％ vs(23.9±1.1)％，P＜0.05]均明顯升高，但ANG

15、-(1-7)組升高的程度明顯低于模型組(P＜0.01)，ANG-(1-7)+A-779組與模型組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。p-p38的相對活性在各組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 6.血漿中ANGⅡ表達水平的測定
　　 模型組、ANG-(1-7)組和ANG-(1-7)+A-779組在球囊損傷術后4周血漿中ANGⅡ的濃度較術前均明顯升高[(0.183±0.015)ng/ml vs.(0.158±0.0

16、15)ng/ml，(0.178±0.015)ng/ml vs.(0.145±0.019)ng/ml和(0.182±0.013)ng/mlvs.(0.149±0.018)ng/ml，P＜0.05]，但三組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論：
　　 1.ANG-(1-7)可明顯減輕兔腹主動脈球囊損傷術后的血管重塑，包括抑制血管收縮性重塑，減輕內(nèi)膜增厚、新生內(nèi)膜面積增加和血管壁中膠原沉積等。
　　 2.A