芳基哌嗪類(lèi)化合物組織選擇性及YM01對(duì)映體抗前列腺增生作用的研究.pdf

1、背景與目的:
　　良性前列腺增生(benignprostatehyperplasia,BPH)是中老年男性常見(jiàn)的多發(fā)疾病,通常在40歲以后開(kāi)始發(fā)生,發(fā)病率隨年齡增加而遞增。腺體的進(jìn)行性腫大會(huì)引起下尿路癥狀(lowerurinarytractsymptoms,LUTS)的產(chǎn)生,臨床上表現(xiàn)為:尿頻、尿急、尿潴留等梗阻癥狀,嚴(yán)重影響了患者的健康和生活質(zhì)量。輕、中度BPH癥狀的患者大多選擇藥物治療為主要治療方式,目前國(guó)內(nèi)外用于治療良性前列

2、腺增生的藥物主要有α1受體拮抗劑、5α-還原酶抑制劑、抗雄激素藥物、中藥和植物制劑4種。α1腎上腺素受體(α1-adrenoceptor,α1-AR)拮抗劑是目前臨床上使用較多的一線藥物。病理研究表明,BPH增生的間質(zhì)富含α1A亞型受體,BPH引發(fā)的LUTS與分布在前列腺、膀胱及尿道近端α1A和α1D亞型受體有關(guān),因此特異性拮抗α1A/1D亞型可達(dá)到減輕前列腺間質(zhì)中平滑肌和膀胱括約肌的收縮程度,減緩BPH癥狀,改善LUTS。大量的實(shí)驗(yàn)證

3、實(shí)傳統(tǒng)的α1受體拮抗劑如哌唑嗪、特拉唑嗪、阿夫唑嗪不具有α1亞型選擇性,對(duì)α1B亞型產(chǎn)生同等程度的拮抗作用,是這類(lèi)藥物產(chǎn)生體位性低血壓、疲憊、困倦等副作用的主要原因。因此,開(kāi)發(fā)具有高尿路選擇性的α1A/1D亞型選擇性拮抗劑,已成為研發(fā)高效低副作用BPH藥物的研究熱點(diǎn)。
　　消旋體YM01是已知α1A/1D選擇性的受體拮抗劑,在臨床上廣泛用于治療BPH引起的下尿路癥狀,本人所在課題組在國(guó)內(nèi)首次合成YM01及其對(duì)映異構(gòu)體。目前尚未有關(guān)

4、于單體的藥理活性報(bào)道,鑒于手性藥物對(duì)映體間藥理學(xué)上的差別,有必要對(duì)單體的藥理活性展開(kāi)研究。
　　本人所在課題組前期以芳基哌嗪為基本骨架,合成了多個(gè)系列的α1受體拮抗劑,并通過(guò)細(xì)胞分子水平的藥物篩選模型篩選出部分對(duì)α1A/1D有較高選擇性的拮抗劑。本研究對(duì)其中的7個(gè)高α1A/1D選擇性的α1受體拮抗劑,進(jìn)行組織選擇性和亞型選擇性的研究;研究的第二部分通過(guò)激素聯(lián)用法誘導(dǎo)大鼠良性前列腺增生模型,對(duì)YM01對(duì)映異構(gòu)體(R/S-YM01)和

5、消旋體YM01的治療作用,及手性藥理學(xué)差異進(jìn)行研究。
　　內(nèi)容和方法：
　　1.離體組織生物功能性測(cè)試實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)選用富含α1-AR三種亞型的大鼠離體組織:胸主動(dòng)脈(α1D)、脾(α1B)、輸精管(α1A)進(jìn)行離體灌流實(shí)驗(yàn)。通過(guò)去甲腎上腺素(noradrenaline,NA)刺激上述組織中α1-AR亞型,引起組織收縮,加入7個(gè)受試化合物后與初始值進(jìn)行比較,并以百分率表示。記錄加入各種劑量的受試化合物之前和之后的全NA量效曲線,

6、進(jìn)行強(qiáng)度分析。量效曲線平行向右移動(dòng),證明是競(jìng)爭(zhēng)性拮抗作用,通過(guò)Prism5.0軟件得出各NA量效曲線的EC50,根據(jù)Schild法計(jì)算拮抗參數(shù)(pA2)值,對(duì)7個(gè)受試化合物的藥理活性、組織選擇性和亞型選擇性進(jìn)行評(píng)價(jià),驗(yàn)證前期放射配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)和分子高通篩選工作的結(jié)果,為化合物是否值得進(jìn)一步深入研究提供依據(jù)。
　　2.YM01對(duì)映異構(gòu)體對(duì)BPH病理模型臟器重量及指數(shù)的影響:建立應(yīng)用激素聯(lián)合誘導(dǎo)SD大鼠良性前列腺增生的模型,設(shè)立假手術(shù)組

7、和模型組灌予生理鹽水作對(duì)照,通過(guò)該模型考察α1受體拮抗劑YM01,連續(xù)灌胃給予B-YM01(3.56mg/kg、11.86mg/kg、35.58mg/kg),A-YM01(3.56mg/kg、11.86mg/kg、35.58mg/kg)和R,S-YM01(11.86mg/kg)4周后,處死動(dòng)物,稱(chēng)量前列腺組織濕重、測(cè)量體積以及計(jì)算指數(shù)。
　　3.YM01對(duì)映異構(gòu)體對(duì)BPH病理模型病理形態(tài)組織的影響:各組大鼠的前列腺組織取前葉和后側(cè)

8、腹葉制成病理切片,分別進(jìn)行HE染色以觀察組織形態(tài)變化、進(jìn)行免疫組化定量以考察α-平滑肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)率,采用ProPlus6.0圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行組織形態(tài)計(jì)量分析。
　　研究結(jié)果：
　　1.7個(gè)受試化合物對(duì)胸主動(dòng)脈(α1D)和輸精管(α1A)的pA2值均大于7,尤其是HJ05對(duì)α1D的pA2值最大為8.44;各受試化合物對(duì)脾(α1B)的pA2值相對(duì)較小;而陽(yáng)性對(duì)照特拉唑嗪則對(duì)各組織的pA

9、2值大小相近。比較各受試化合物對(duì)上述組織作用的pA2值,其中A-YM01、B-YM01、R,S-YM01、B-J04、HJ05對(duì)α1D的作用是對(duì)α1B的作用大于10倍,尤其是HJ05對(duì)α1D的作用是α1B的26倍,B-YM01對(duì)α1D的作用是α1B的22倍,而各受試化合對(duì)α1A的作用均小于α1D五分之一倍。結(jié)果證實(shí)受試化合物均為選擇性α1A1/1D亞型化合物。
　　2.模型組大鼠前列腺濕重、濕重指數(shù)、體積、體積指數(shù)、膀胱重量等直觀

10、指標(biāo)與假手術(shù)組相比,均明顯增大(P<0.01)。與模型組相比,A-YM01與B-YM01兩對(duì)映異構(gòu)體各劑量組對(duì)大鼠前列腺的直觀指標(biāo)均有不同程度的減少(P<0.05~0.01),而且B-YM01各劑量組對(duì)前列腺增生的抑制作用優(yōu)于A-YM01相應(yīng)劑量組。
　　3.假手術(shù)組大鼠前列腺的腺腔大小不一,且部分腺體有皺襞形成,腺上皮細(xì)胞呈單層柱狀或假?gòu)?fù)層柱狀排列,腺體外周有結(jié)締組織包圍;與之相比,模型組腺腔明顯擴(kuò)張(P<0.01),腺體周?chē)Y(jié)

11、締組織增生,腺上皮細(xì)胞明顯增厚(P<0.01),且通過(guò)檢測(cè)上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的PCNA表達(dá)以及α-SMA表達(dá),模型組均明顯增加(P<0.01)。通過(guò)形態(tài)計(jì)量分析,與模型組相比,A-YM01和B-YM01各劑量組對(duì)前列腺的腺腔、腺上皮以及間質(zhì)均有影響。A-YM01對(duì)于腺腔周長(zhǎng)以及腺腔相對(duì)體積的抑制作用優(yōu)于B-YM01,然而B(niǎo)-YM01對(duì)間質(zhì)相對(duì)體積以及腺上皮相對(duì)體積的抑制作用則優(yōu)于A-YM01。A-YM01與B-YM01均有PCNA以及α

12、-SMA的表達(dá)有抑制作用,但B-YM01的抑制作用強(qiáng)于A-YM01。
　　結(jié)論:
　　1.7個(gè)受試化合物均對(duì)α1A和α1D受體有較高選擇性,并具有組織選擇性,以HJ05的選擇性和活性最好,它們的選擇性均優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥特拉唑嗪。
　　2.A-YM01和B-YM01對(duì)雌雄激素誘導(dǎo)的大鼠BPH模型,均有抑制前列腺濕重增生和體積增生的作用,而且對(duì)前列腺的增生程度來(lái)說(shuō),B-YM01的抑制作用更佳。
　　3.從病理組織形態(tài)角