miR-372對(duì)胃部細(xì)胞的影響及作用機(jī)制研究.pdf

1、胃癌是一種很常見的癌癥，在中國是死亡率較高的癌癥之一。在所有男性和女性惡性腫瘤中，胃癌發(fā)病率分別列第4、第5。我國每年約有30萬人死于胃癌，另有約40萬新發(fā)病例。盡管手術(shù)聯(lián)合放療等先進(jìn)技術(shù)的應(yīng)用于胃癌的治療，但是仍然沒有一種方法能徹底治療胃癌。這主要是由于沒有對(duì)胃癌的發(fā)病機(jī)制有一個(gè)很清楚的了解。
　　 近期研究發(fā)現(xiàn)多種miRNAs在胃癌表達(dá)異常并直接參與調(diào)控其發(fā)生和發(fā)展。例如:miR-106a在胃癌組織中的表達(dá)量明顯更高，并且與

2、胃癌的腫瘤大小、分期、腹腔和遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移直接相關(guān)，提示miR-106a可能具有促進(jìn)胃癌進(jìn)展的作用。Let-7 microRNA家族成員在胃癌組織呈低表達(dá)，其具有負(fù)調(diào)控HMGA2基因的作用，而高表達(dá)的HMGA2蛋白在胃癌組織，腫瘤更容易向漿膜外侵襲，患者預(yù)后更差。這些研究證據(jù)揭示了miRNAs可能通過各種不同的方式和途徑對(duì)胃癌的癌變過程起促進(jìn)或者抑制作用，進(jìn)而影響其生物學(xué)行為。本實(shí)驗(yàn)中，通過對(duì)15對(duì)臨床胃腺癌標(biāo)本的分析發(fā)現(xiàn)，miR-37

3、2在胃腺癌組織中的表達(dá)量普遍高于癌旁組織。在兩種胃癌細(xì)胞(AGS和HGC-27)和正常的人胃粘膜細(xì)胞(GES-1)分析發(fā)現(xiàn)，miR-372僅在AGS細(xì)胞系中高表達(dá)，這提示miR-372的表達(dá)可能與癌癥類型或起源有關(guān)。通過Hoechst33258染色方法和流式細(xì)胞分析細(xì)胞凋亡、Western blot檢測Caspase-8和PARP的表達(dá)等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)抑制miR-372的表達(dá)可誘導(dǎo)AGS細(xì)胞凋亡，而在HGC-27細(xì)胞系中過表達(dá)miR-372發(fā)

4、現(xiàn)可以促進(jìn)細(xì)胞增殖。通過熒光素酶活性以及突變分析實(shí)驗(yàn)、Western blot實(shí)驗(yàn)分別抑制或過表達(dá)AGS細(xì)胞和HGC-27細(xì)胞中的miR-372，從“正”和“反”兩方面實(shí)驗(yàn)證明miR-372可以直接抑制TNFAIP1的表達(dá)并激活NFκB轉(zhuǎn)錄活性。TNFAIP1是受腫瘤發(fā)生的促炎癥因子腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素6(IL6)誘導(dǎo)的蛋白。在HeLa細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)過表達(dá)TNFAIP1可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，大鼠的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)TNFAIP1能和PC

5、NA以及DNA聚合酶δ的小亞基P50相互作用，也可以在PCNA存在的條件下激活DNA聚合酶的活性，TNFAIP1蛋白也可能在TNFα信號(hào)通路以及DNA合成或者細(xì)胞凋亡中扮演了重要的角色。另一方面，運(yùn)用真核表達(dá)質(zhì)粒pCMV-myc-TNFAIP1在胃癌細(xì)胞中過表達(dá)TNFAIP1能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的凋亡，同時(shí)Caspase8和PARP也被激活，這些影響與在胃癌細(xì)胞中干擾miR-372所引起的效果一致。
　　 因此，我們的研究表明miR-