應(yīng)用RT-PCR對過表達(dá)E2F-1-Cdx2胃癌細(xì)胞基因芯片中差異表達(dá)基因的驗(yàn)證分析.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩71頁未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的：通過RT-PCR驗(yàn)證分析基因芯片的差異基因，進(jìn)一步探索過表達(dá)E2F-1/Cdx2基因影響胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的作用機(jī)理。 方法： 1.脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染pCMV-E2F-1-HA2、pCMV-Cdx2-HA2重組載體、pCMV-HA2空載體至MGC-803胃癌細(xì)胞，分別提取轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的TotalRNA和蛋白，采用RT-PCR和WestemBlot技術(shù)驗(yàn)證pCMV-E2F-1-HA2、pC

2、MV-Cdx2-HA2、pCMV-HA2質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)； 2.抽取純化MGC-803/E2F-1、MGC-803/Cdx2、MGC-803/HA和MGC-803細(xì)胞的TotalRNA。采用逆轉(zhuǎn)錄的方法合成cDNA，結(jié)合普通PCR反應(yīng)擴(kuò)增所選差異基因的目的片段。采用凝膠成像系統(tǒng)灰度比值半定量的方法，獲得RT-PCR的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 3.通過對半定量法得到的各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，驗(yàn)證分析基因芯片結(jié)果。 結(jié)果：

3、1.應(yīng)用RT-PCR和WestemBlot分別檢測到了轉(zhuǎn)染后E2F-1、Cdx2在兩組細(xì)胞中mRNA和融合蛋白的表達(dá)； 2.RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證分析得到的結(jié)果與基因芯片篩選的差異基因變化一致。 結(jié)論： 1.成功轉(zhuǎn)染了過表達(dá)E2F-1和Cdx2基因至胃癌細(xì)胞株MGC-803細(xì)胞； 2.RT-PCR驗(yàn)證分析過表達(dá)Cdx2胃癌細(xì)胞中六條基因的結(jié)果與其基因芯片篩選的差異表達(dá)基因改變一致； 3.RT-PCR

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論