脂質(zhì)體藥物載體優(yōu)選及干預(yù)瘢痕增生效果評價.pdf

1、目的：比較攜帶5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil，5-FU)納米級醇脂體(5-FUEthosomal Suspensions，5-FU ES)和傳遞體(5-FU Deformable LiposomalSuspensions，5-FU DS)在離體增生性瘢痕組織的滲透性能及滯留效果，優(yōu)選并制備合適的脂質(zhì)微粒凝膠藥物載體并評價其對動物瘢痕組織增生的效果，為脂質(zhì)微粒藥物載體攜帶5-FU進(jìn)入增生性瘢痕組織，干預(yù)其增生提供相關(guān)實驗依據(jù)。

2、
　　 方法：1.本實驗采用Touitou法制備5-FU ES(5-FU終濃度為0.4％(w/v))和Cevc法制備5-FU DS(5-FU終濃度為0.4％(w/v))。分別通過超高速離心法和微柱離心法檢測兩者包封率，采用透射電鏡觀察其形態(tài)并應(yīng)用粒度儀檢測粒徑及分散系數(shù)。
　　 2.借助體外透增生性瘢痕實驗，比較兩者透瘢痕組織特點：以高效液相檢測5-FU累積滲透量和滯留量，共聚焦顯微鏡觀測羅丹明標(biāo)記的醇脂體及傳遞體在瘢痕

3、組織的熒光強度。
　　 3.以卡波姆作為凝膠基質(zhì)分別將5-FU ES和5-FU DS制備為載5-FU醇脂體凝膠(5-FU Ethosomal Gel，5-FU EG)(5-FU終濃度為0.4％(w/v))以及載5-FU傳遞體凝膠(5-FU Deformable Liposomal Gel，5-FU DG)(5-FU終濃度為0.4％(w/v))，通過粒度儀檢測并比較兩者凝膠制劑存儲穩(wěn)定性，優(yōu)選合適的攜帶5-FU脂質(zhì)微粒載體。

4、>　　 4.通過構(gòu)建兔耳增生性瘢痕模型，激光共聚焦掃描、HE染色、WesternBlot等方法研究其對在體瘢痕組織增生的干預(yù)效果。
　　 結(jié)果：1.制備所得5-FU ES粒徑為81.74±9.37 nm，分散系數(shù)PDI為0.1±0.03，包封率為10.95％±0.0086；5-FU DS粒徑為73.7±9.45 nm，分散系數(shù)PDI為0.22±0.06，包封率為15.05％±0.0189。比較兩種納米級脂質(zhì)體的粒徑及分散系數(shù)，

5、兩者無顯著差異，結(jié)果均呈P>0.05，但5-FU DS包封率高于5-FU ES，兩者有顯著差異，P<0.01。
　　 2.透瘢痕組織24 h后，5-FU ES累積透過量(μg/ml/cm2)為14.12±0.1，在瘢痕組織滯留量(μg/cm2)為10.74±1.17，羅丹明標(biāo)記醇脂體(RhoEnthosomal Suspension，Rho ES)在瘢痕組織熒光強度為182±18.3；5-FU DS累積透過量(μg/ml/cm2

6、)為12.35±1.21，在瘢痕組織滯留量(μg/cm2)為17.48±0.82，羅丹明標(biāo)記傳遞體(Rho Deformable Liposomal Suspension，RhoDS)在瘢痕組織熒光強度為241.45±7.63。比較瘢痕組織5-FU累積透過量，5-FU ES明顯高于5-FU DS和對照組(P<0.05，P<0.01)，然而，比較5-FU在瘢痕組織滯留量以及羅丹明在瘢痕組織熒光強度，則為DS組明顯高于ES組和對照組(P<0

7、.05，P<0.001)。提示納米級5-FU ES和5-FU DS均具有透過增生性瘢痕組織的能力，并能攜帶5-FU在瘢痕組織滯留。
　　 3.比較兩者凝膠制劑存儲穩(wěn)定性。在4±1℃脂質(zhì)體微粒凝膠存儲30天后粒徑變化增幅明顯小于25±1℃存儲30天(5-FU EG：P<0.05；5-FU DG：P<0.05)；4±1℃存儲30天后，5-FU EG粒徑明顯小于5-FU ES和5-FU DG(P>0.05，P>0.05)，結(jié)果提示5-

8、FU EG在4±1℃存儲30天后粒徑穩(wěn)定性能好于5-FU DG。
　　 綜合兩者制備方法以及存儲穩(wěn)定性，最后優(yōu)選5-FU EG作為動物增生性瘢痕組織的脂質(zhì)微粒藥物載體。
　　 4.激光共聚焦掃描方法檢測發(fā)現(xiàn)，羅丹明標(biāo)記醇脂體凝膠(RhoEnthosomal Gel，Rho EG)3 h后即能夠進(jìn)入兔耳瘢痕組織內(nèi)，給藥24 h后，Rho EG擴(kuò)散進(jìn)入瘢痕組織真皮深層。HE染色結(jié)果顯示，應(yīng)用5-FU EG的兔耳瘢痕指數(shù)(Sc

9、ar Elevation Index，SEI)較空白對照組顯著下降(P<0.05)。同時Western Blot結(jié)果說明應(yīng)用5-FU EG的兔耳瘢痕組織內(nèi)Ⅰ型膠原蛋白(Ⅰ-Collagen protein)較5-FU凝膠組(5-Fluorouracil Gel，5-Fu Gel)以及空白對照組下降明顯(P<0.05，P<0.05)。
　　 結(jié)論：1.不同方法制備5-FU ES和5-FU DS的粒徑?jīng)]有差異，但5-FUDS的包封率