大麻素Ⅱ型受體激動劑在惡性黑素瘤中血管生成作用機(jī)制的研究.pdf

1、軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院解放軍總醫(yī)院博士學(xué)位論文大麻素Ⅱ型受體激動劑在惡性黑素瘤中血管生成作用機(jī)制的研究姓名：楊潔申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：韋立新李恒進(jìn)20090601軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文響；MTT、劃痕實驗和Transwel1小室模型檢測JWH133和WIN55，2122對A375細(xì)胞增殖，遷移和侵襲作用的影響；RealtimePCR、和ELISA檢測JWH133和WIN55，2122對h375細(xì)胞VEGF在mRNA和

2、蛋白水平表達(dá)的影響；TUNEL檢測JWH133和WIN55，2122對A375細(xì)胞凋亡的影響。2體內(nèi)實驗以人惡性黑素瘤A375細(xì)胞裸鼠移植瘤為研究模型建立人惡性黑素瘤裸鼠移植瘤動物模型，觀察體內(nèi)成瘤情況。應(yīng)用免疫熒光檢測瘤組織中CBR2的表達(dá)與定位；RealtimePCR、Westernblot和免疫組化檢測CBR2激動劑JWH133和win55，2122對腫瘤組織中CBR2和VEGF在mRNA和蛋白水平表達(dá)的影響；TUNEL檢測JWH

3、133和win55，2122對腫瘤組織細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果1人惡性黑素瘤A375細(xì)胞體外模型實驗結(jié)果①人惡性黑素瘤A375細(xì)胞在mRNA和蛋白水平均表達(dá)CBR2，其表達(dá)定位于胞漿乖胞膜，胞核無染色。②不同濃度JWH133和WIN55，2122(00I／01／1／10／100umol／L)對A375細(xì)胞增殖具有抑制作用，48h達(dá)到高峰(PO05)。③JWH133和WIN55，2122抑制h375細(xì)胞的遷移和侵襲能力；與對照組比較，lumo

4、l／L濃度JWH133組和WIN55，2122組細(xì)胞相對遷移面積顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(尸005)。④不同濃度JWH133和win55，2122(1umol／Sumol／10umol／L)刺激A375細(xì)胞24h，48h和72h后，可降低VEGF在不同時相點mRNA和蛋白水平的表達(dá)，與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(尸O05)；并且這種抑制效應(yīng)呈時間劑量依賴關(guān)系，JWn133和WIN55，212—2劑量越大，刺激時間越長，VEGF表達(dá)