PPAR-γ激動劑調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素和脂聯(lián)素系統(tǒng)的心血管保護機制.pdf

1、目的：在體和離體實驗探討過氧化物酶增殖體活化受體-γ(Peroxisome proliferators activated receptorγ，PPARγ)激活對腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensin system，RAS)的影響及其血管保護作用。
　　 材料與方法：
　　 (1)實驗動物研究38只體重190～210 g雄性Wistar-Kyoto鼠隨機分為4組：普通飼料組(Con組n=8)；高膽固醇組

2、(Cho組，n=10)，喂高膽固醇飼料；羅格列酮干預組(Ros組，n=10)，高膽固醇飼料加羅格列酮(4 mg.Kg-1.day-1)；厄貝沙坦干預組(Irb組，n=10)，高膽固醇飼料加厄貝沙坦(50 mg.Kg-1.day-1)。高膽固醇適應性飼養(yǎng)一個月后開始藥物干預，持續(xù)5個月。處死鼠前禁食12 h，稱體重，左心室穿刺采集血標本，分別使用全自動生化分析儀和放射免疫法測定血脂、血漿及主動脈組織中血管緊張素II(ANG II)的濃度；

3、分離胸主動脈，取主動脈弓近段3 mm，進行HE染色顯微鏡下和電鏡下觀察主動脈組織形態(tài)學變化。半定量逆轉錄聚合酶鏈反應(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)、免疫組織化學及Western Blot方法測定血管緊張素II受體(ATR)mRNA與蛋白的表達。
　　 (2)細胞研究原代培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細胞(Vascular Smooth Muscle Cells

4、，VSMCs))，傳代后取4～8代細胞進行后續(xù)的實驗。用終濃度為1μmol.l-1血管緊張素II誘導6 h，隨機分成：空白對照組(Con組，含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基)，ANGII組(1μmol.l-1 ANG II)，不同濃度羅格列酮(20、30、40、50μmol.l-1)干預組，30μmol.l-1羅格列酮干預不同時間組(6、12、18、24 h)。分別采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT)和流式細胞分析技術(FCM)觀

5、察血管平滑肌細胞的增殖程度和增殖周期的變化；RT-PCR和Western blot測定不同干預條件下VSMCs ATRmRNA及蛋白的表達水平。
　　 結果：(1)羅格列酮和厄貝沙坦均能明顯抑制高膽固醇飼養(yǎng)引起的體重增加，而且厄貝沙坦的作用強于羅格列酮(P<0.05)；(2)高膽固醇飼養(yǎng)6個月引起明顯高脂血癥，包括甘油三酯(TG)、膽同醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)升高(P<0.01)，并呈腹型肥胖體態(tài)，與Cho組相比，

6、羅格列酮顯著抑制高膽固醇飼養(yǎng)引起TG、TC、LDL-C的升高(P<0.01)，厄貝沙坦對TG、TC的作用與羅格列酮相似，然而對LDL-C沒有影響；(3)血漿ANG II的濃度各亞組之間無顯著性差異。Cho組主動脈組織中ANG II的水平明顯高于對照組(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦一致地抑制主動脈組織局部ANG II的升高(P<0.01)；(4)Cho組主動脈弓近段可見早期動脈粥樣硬化的脂質(zhì)條紋，HE染色顯示血管內(nèi)膜下大量脂質(zhì)沉積、

7、平滑肌細胞增生、排列紊亂并向內(nèi)膜下移行。電鏡下顯示內(nèi)皮細胞變性壞死，向管腔剝離、脫落，細胞間連接變直變寬，內(nèi)皮下間隙擴大。但是在所有的切片中尚未觀察到典型的動脈粥樣硬化斑塊，上述特征性的早期動脈粥樣硬化的病理改變在對照組及兩藥物干預組均未見到；(5)Cho組主動脈AT1R和AT2R mRNA及蛋白表達明顯高于對照組(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦同等程度地抑制AT1R mRNA及蛋白表達(P<0.01)。然而對AT2R mRNA及蛋

8、白表達的作用相反，前者上調(diào)AT2R的表達，后者下調(diào)(P<0.05，0.01)；(6)細胞實驗顯示ANG II組吸光度(A值)明顯高于對照組(P<0.01)，不同濃度的羅格列酮干預12 h及30μmol.l-1羅格列酮干預不同時間后，A值均明顯降低(P<0.05，0.01)；FCM檢測顯示ANG II組PI，SPF，S期和G2/M期細胞百分比明顯高于對照組(P<0.01)，隨著羅格列酮干預濃度的增加或干預時間的延長，PI、SPF及增殖期細

9、胞的百分比均明顯下降，接近對照組(P<0.05，0.01)；(7)基礎狀態(tài)下，體外培養(yǎng)的大鼠VSMCs AT1R和AT2R均有少量的基礎表達。ANG II顯著上調(diào)AT1R mRNA及蛋白的表達(P<0.05，0.01)，下調(diào)AT2RmRNA及蛋白的表達(P<0.05)。與ANG II組相比，以不同濃度(20、30、50)μmol.l-1羅格列酮干預12 h及同一濃度(30μmol.l-1)干預不同時間(6、12、24 h)均顯著抑制AT

10、1R mRNA及蛋白的表達(P<0.05，0.01)，升高AT2R mRNA及蛋白的表達(P<0.05，0.01)，在50μmol.l-1濃度組和以30μmol.l-1干預24 h作用最強。
　　 結論：
　　 (1)羅格列酮通過改善脂質(zhì)代謝、降低主動脈組織局部血管緊張素II的濃度、在轉錄和翻譯水平下調(diào)血管緊張素II1型受體、上調(diào)2型受體的表達，拮抗高膽固醇飲食誘發(fā)大鼠早期動脈粥樣硬化的形成：
　　 (2)羅格列

11、酮以濃度和時間依賴形式在基因和蛋白水平抑制血管緊張素II誘導血管平滑肌細胞AT1R表達的增加、進一步升高AT2R表達，從而抑制血管平滑肌細胞增殖，發(fā)揮血管保護作用。
　　 目的：在體研究過氧化物酶增殖體活化受體-γ(Peroxisome Proliferators Activated ReceptorGamma，PPARγ)活化對心肌腎素-血管緊張素(Renin-Angiotensin System，RAS)和脂聯(lián)素(Adipo

12、nectin)系統(tǒng)的影響及可能的心臟保護作用。
　　 方法：38只體重190～210 g雄性Wistar-Kyoto鼠隨機分為下列組：普通飼料組(Con組n=8)；高膽同醇組(Cho組，n=10)，喂高膽固醇飼料；羅格列酮干預組(Ros組，n=10)，高膽固醇飼料加羅格列酮(4 mg·Kg-1.day-1)；厄貝沙坦干預組(Irb組，n=10)，高膽固醇例料加厄貝沙坦(50 mg·Kg-1.day-1)。高膽固醇適應性飼養(yǎng)1個月

13、后開始藥物干預，持續(xù)5個月。處死動物前禁食12 h，稱體重、左心室穿刺采集血標本、分離左心室肌組織，分別使用全自動生化分析儀、放射免疫法和ELISA測定血脂、血漿和心肌組織中血管緊張素II和脂聯(lián)素水平。以左心室重量與體重的比值(Left Ventricular Weighit/Body Weight，LVW/BW mg/g)，平均心肌細胞直徑、HE和Masson染色顯微鏡下觀察評估心肌形態(tài)的變化。半定量逆轉錄聚合酶鏈反應(Reverse

14、 Transcription-Polymerase Chain Reaction.RT-PCR)、免疫組織化學及Western Blot方法測定血管緊張素II受體(ATR)和脂聯(lián)素受體(AdipoR)mRNA與蛋白的表達。
　　 結果：(1)與對照組相比，高膽固醇組大鼠體重明顯增加，呈腹型肥胖體態(tài)，羅格列酮、厄貝沙坦均顯著抑制高膽固醇飼養(yǎng)誘發(fā)的體重增加(P<0.05，0.01)。以LVW/BW比值和平均心肌細胞直徑增加，心肌細胞

15、中大量脂質(zhì)沉積為病理特征的左室肥厚，尚未觀察到心肌間質(zhì)纖維化，然而這些病理改變在對照組和兩藥物干預組幾乎沒有發(fā)現(xiàn)(P<0.05，0.01)；(2)高膽固醇飼養(yǎng)誘發(fā)明顯的高脂血癥，包括高膽固醇(TC)、高甘油三酯(TG)和高低密度脂蛋白膽固醇血癥(LDL-C)(P<0.01)。羅格列酮和厄貝沙坦干預后明顯抑制TC和TG的升高(P<0.01)，羅格列酮抑制高膽固醇飼養(yǎng)引起LDL-C的升高(P<0.01)，而厄貝沙坦對其沒有作用，兩藥物組間相

16、比有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；(3)血漿ANG II濃度在各組之間比較無統(tǒng)計學意義。羅格列酮和厄貝沙坦顯著抑制高膽固醇飼養(yǎng)誘發(fā)心肌ANG II水平的升高(P<0.01)。與對照組相比，高膽同醇組心肌AT1R和AT2R基因和蛋白表達明顯升高(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦干預后明顯抑制了 AT1R基因和蛋白表達的升高(P<0.01)，并且進一步上調(diào)AT2R的表達(P<0.05)；(4)高膽固醇飼養(yǎng)大鼠心肌脂聯(lián)素水平、AdipoR1

17、mRNA和蛋白表達明顯低于普通飼料組(P<0.01)，羅格列酮和厄貝沙坦均能拮抗高膽固醇血癥誘發(fā)脂聯(lián)素水平和AdipoR1表達的下降(P<0.01)，而AdipoR2 mRNA和蛋白的表達水平在各實驗亞組之間無統(tǒng)計學差異。
　　 結論：
　　 (1)羅格列酮通過改善脂質(zhì)代謝、抑制體重增加、降低心肌組織局部ANG II水平、在基因和蛋白水平抑制AT1R、升高AT2R的表達，拮抗高膽固醇飲食誘發(fā)的心肌肥厚；
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