腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活與脂代謝紊亂在腎損傷中的相互作用研究.pdf

1、目的:高血壓和高脂血癥是慢性腎臟病(choronic kidney disease，CKD)發(fā)生發(fā)展的獨立危險因素，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system, RAS)激活是CKD腎性高血壓發(fā)生的主要機制之一。研究表明，RAS激活與高脂血癥在動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)進展中存在相互作用。然而，脂代謝紊亂與RAS激活在介導腎臟損傷中是否存在相互作用及可能的機制如何，目前尚不清楚。本研

2、究旨在通過體內、外實驗，觀察脂代謝紊亂與RAS激活在介導腎臟損傷中的作用，并探討可能的作用機制。
　　 方法:將8周齡雄性載脂蛋白E基因敲除(Apolipoprotein Eknockout, ApoE-/-)小鼠隨機分為高脂飲食組(n=8)和普通飲食對照組(n=8)，8周后處死小鼠收集血漿標本及腎臟組織標本，觀察高脂血癥對腎臟局部RAS激活的影響及其在腎損傷中的作用;體外研究，脂質刺激分別觀察其對人近端腎小管上皮細胞(Huma

3、n proximaltubular epithelial cell line，HK-2)和人腎小球系膜細胞（Human mesangial cell，HMC）胞內RAS的表達及其可能的作用機制;血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）刺激分別觀察其對HK-2和HMC胞內脂質堆積及脂代謝信號通路的影響。放免法檢測動物血漿中循環(huán)RAS水平，臨床生化法檢測血漿脂質譜，HE染色和Masson染色評估腎臟炎癥細胞浸潤及胞外基質堆積，MT

4、T及流式細胞儀觀察細胞生長及增殖情況，油紅O染色及化學酶促-比色法觀察胞內中脂質積聚情況，免疫組化、免疫熒光染色檢測腎臟組織及細胞中蛋白表達，實時定量PCR及Western Blot法檢測組織及細胞內RAS成分、上皮-間充質轉分化相關因子E-cadherin，α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)和fibronectin、胞外基質、低密度脂蛋白受體(low densitylipoprotein rec

5、eptor, LDLr)脂代謝信號通路以及雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target ofrapamycin, mTOR)信號通路相關因子表達。
　　 結果:1）與對照組比，高脂飲食組小鼠血脂水平明顯升高，伴有腎小管間質胞外基質堆積增多。除血漿前腎素水平明顯低于對照組外，其它指標，如血漿腎素、血管緊張素Ⅰ及AngⅡ水平兩組間無明顯差異。進一步研究顯示，腎臟局部RAS成分蛋白表達均明顯升高，與血脂水平呈正相關，與誘導腎臟細胞

6、EMT呈正相關。2）脂質刺激HK-2、HMC后，胞內RAS成分表達明顯增多，提示胞內RAS活化。同時，HK-2 E-cadherin mRNA及蛋白水平較對照組降低，而α-SMA和fibronectin水平較對照組升高，促進HMC增殖，胞外基質表達增加，提示細胞發(fā)生功能改變。進一步研究顯示，胞內mTOR, S6k1和4EBP1基因的表達及磷酸化狀態(tài)蛋白水平明顯升高，提示mTOR信號通路激活可能參與了脂質刺激的細胞增殖。3）AngⅡ刺激后

7、，HK-2及HMC胞內脂質積聚顯著增加。并誘導HK-2發(fā)生上皮-間充質轉分化，促進HMC增殖，胞外基質表達增加。同時，胞內LDLr，固醇調節(jié)元件結合蛋白-2(sterolregulatory element binding protein-2，SREBP-2)及SREBP裂解激活蛋白(SREBPcleavage-activating protein, SCAP)表達升高，激光共聚焦顯微鏡證實，AngⅡ能夠刺激胞內SCAP/SREBP-2

8、從內質網(wǎng)到高爾基體的共轉位，進而上調LDLr基因轉錄，促進細胞增加膽固醇攝入。
　　 結論:脂代謝紊亂可誘導腎固有細胞表型轉化，促進腎小管間質纖維化和腎系膜胞外基質分泌，該過程可能與腎臟局部RAS激活有關，其中mTOR信號通路可能在調節(jié)相關基因和蛋白表達中發(fā)揮了重要作用。另一方面，AngⅡ可通過破壞LDLr負反饋調節(jié)增加腎臟固有細胞內膽固醇攝入，促進脂質沉積，進而介導腎小球、腎小管細胞損傷。本研究闡明了腎臟局部RAS激活與脂代謝