ERβ1相互作用蛋白的篩選及ERβ1—Id1信號(hào)通路對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖抑制作用及機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌近20年來發(fā)病率呈明顯上升的趨勢(shì)。乳腺癌是一種雌激素依賴性腫瘤,目前公認(rèn)雌激素通過和受體的結(jié)合介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。雌激素受體分α和β兩種。既往研究表明Erβ(Estrogen receptorβ)是腫瘤的抑癌基因,但其作用機(jī)制至今仍不清楚。
　　 目的:本研究目的是試圖通過酵母雙雜交篩選人類基因中與ERβ1有相互作用的蛋白,研究Erβ與相互作用蛋白結(jié)合的意義,為進(jìn)一步研究Erβ的生物學(xué)功能奠定基

2、礎(chǔ)。
　　 研究方法:第一部分用酵母雙雜交篩選人類基因cDNA文庫中與ERβ1-LBD結(jié)構(gòu)域相互作用關(guān)系的未知蛋白;第二部分用哺乳動(dòng)物雙雜交系統(tǒng)確認(rèn)兩蛋白之間相互作用的結(jié)構(gòu)域及雌激素對(duì)該作用的影響;第三部分采用強(qiáng)制表達(dá)和基因沉默技術(shù)以及報(bào)告基因分析等分子生物學(xué)技術(shù)分析Erβ與相互作用蛋白結(jié)合的生物學(xué)效應(yīng)及其在人乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)意義。
　　 研究結(jié)果:酵母雙雜交結(jié)果發(fā)現(xiàn)ERβ1與分化抑制因子1(inhititory di

3、fference-1,Id1)之間存在著相互作用的效應(yīng),經(jīng)免疫共沉淀等多種方法證明ERβ1-Id1間確實(shí)存在相互作用關(guān)系。在哺乳動(dòng)物雙雜交系統(tǒng)中我們不僅再次證實(shí)ERβ1-Id1間存在相互作用,而且還證明Id1的HLH結(jié)構(gòu)域與ERβ1的LBD結(jié)構(gòu)域是相互作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。證明雌激素能干擾ERβ1-Id1之間的相互作用。在第三部分中證實(shí)ERβ1對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖具有明顯的抑制作用,這種增殖抑制與ERβ1上調(diào)p21、p16

4、等抑制細(xì)胞增殖的基因有關(guān)。在p21基因啟動(dòng)子活性分析的研究中證明ERβ1上調(diào)p21基因表達(dá)的作用具有Id1依賴性;發(fā)現(xiàn)ERβ1-Id1信號(hào)通路可參與抑制乳腺癌細(xì)胞增殖機(jī)制。
　　 結(jié)論:發(fā)現(xiàn)了ERβ1新的相互作用蛋白Id1,ERβ1-Id1相互作用的結(jié)構(gòu)域是ERβ1的LBD與Id1的HLH結(jié)構(gòu)域。ERβ1-Id1間的相互作用受雌激素干擾。ERβ1-Id1信號(hào)通路的基本生物學(xué)作用是抑制乳腺癌細(xì)胞增殖,其抑制增殖的分子機(jī)制是上調(diào)p2