奧曲肽對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901 P300組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的效應(yīng).pdf

1、研究背景:
　　調(diào)控細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡的鋅指蛋白(zinc finger protein which regulatesapoptosis and cell cycle arrest，ZAC)為一種轉(zhuǎn)錄因子，具有轉(zhuǎn)錄活化活性和DNA結(jié)合功能，可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞G1期阻滯。P300是細(xì)胞內(nèi)具有廣泛功能的轉(zhuǎn)錄激活因子，其組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(histone acetyltransferase，HAT)結(jié)構(gòu)域是P300乙?；孜锏鞍缀?/p>

2、轉(zhuǎn)錄激活的核心結(jié)構(gòu)域。ZAC作為1個(gè)轉(zhuǎn)錄輔因子與HAT和/或組蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)協(xié)作調(diào)控基因表達(dá)。前期的研究表明，生長(zhǎng)抑素(somatostatin，SST)類似物奧曲肽(otreotide，OCT)可以時(shí)間和濃度依賴方式誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞ZAC基因的表達(dá)，ZAC在OCT抑制胃癌細(xì)胞增殖通路具有關(guān)鍵作用;HDAC抑制劑曲古抑菌素A(trichostatin A，TSA)可上調(diào)胃癌細(xì)胞ZAC基因表

3、達(dá)。
　　目的:
　　觀察OCT對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901 P300-HAT活性的效應(yīng)，并探討其作用機(jī)制。
　　材料與方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)分組將胃癌細(xì)胞SGC7901隨機(jī)分為4組:實(shí)驗(yàn)組1-3加入終濃度為10nmol/L的OCT培養(yǎng)液，分別作用12h、24h和48h;對(duì)照組，加入無(wú)OCT培養(yǎng)液。收集4組細(xì)胞，分別提取核蛋白。
　　2.OCT對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901 P300-HAT活性的效應(yīng)應(yīng)用活性光度法檢測(cè)

4、4組細(xì)胞核蛋白P300-HAT的活性，觀察OCT對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901 P300-HAT活性的效應(yīng)。
　　3.OCT對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901P300基因表達(dá)的效應(yīng)應(yīng)用Western blot檢測(cè)4組細(xì)胞P300蛋白的量，觀察OCT對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901 P300基因表達(dá)的效應(yīng)。
　　4.胃癌細(xì)胞SGC7901 ZAC與P300的相互作用應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫共沉淀方法提取4組細(xì)胞ZAC-P300復(fù)合物，應(yīng)用Western blo

5、t檢測(cè)4組細(xì)胞ZAC-P300復(fù)合物的量，觀察胃癌細(xì)胞SGC7901 ZAC與P300的相互作用。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)， P＜0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果:
　　1.OCT對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901 P300-HAT活性的效應(yīng)對(duì)照組、12h、24h和48h組胃癌細(xì)胞SGC7901 P300-HAT活性分別為:0.00068627433±0.0

6、00254713082、0.00163398700±0.000123363301、0.00269607833±0.000084904553和0.00388888867±0.000141507396，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.05)。10nmol/L OCT以時(shí)間依賴的方式升高胃癌細(xì)胞SGC7901 P300-HAT活性。
　　2.OCT對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901P300基因表達(dá)的效應(yīng)對(duì)照組、12h、24h和48h組胃

7、癌細(xì)胞SGC7901 P300/β-Tubulin值分別為:0.211±0.002、0.210±0.007、0.208±0.014和0.216±0.004。3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組P300基因表達(dá)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　3.胃癌細(xì)胞SGC7901 ZAC與P300的相互作用胃癌細(xì)胞SGC7901 ZAC與P300蛋白可相互作用。對(duì)照組、12h、24h和48h組胃癌細(xì)胞SGC7901ZAC-P300復(fù)合物的相對(duì)量分別為:581