p53在滑膜成纖維細(xì)胞炎癥和增生中的作用.pdf

1、目的：深入探討p53在滑膜成纖維細(xì)胞(FLS)炎癥與增生中的作用，包括p53與NF-κB、p38、JNK及其下游促炎癥性細(xì)胞因子和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)之間的關(guān)系，以及p53對FLS增生相關(guān)信號通路的影響，揭示p53在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)發(fā)病機(jī)制中的重要作用。 方法：取人膝關(guān)節(jié)滑膜組織體外培養(yǎng)FLS。(1)分別與0.1 ng/ml、1 ng/ml、10ng/ml IL-1β或TNF-α共同孵育24小時，收集培養(yǎng)上清行ELISA

2、檢測細(xì)胞因子IL-6、IL-1β以及MMP-1和MMP-13的水平；同時裂解細(xì)胞收獲蛋白，利用Western Blot方法檢測p53和p21等蛋白的表達(dá)；(2)用電轉(zhuǎn)法將p53 siRNA(small interfering RNA)轉(zhuǎn)入FLS細(xì)胞并設(shè)立對照。3日后，或在這些細(xì)胞中重復(fù)步驟(1)，或與IL-1β(2ng/ml)共同孵育15分鐘后裂解細(xì)胞收集蛋白，用Western Blot方法檢測信號通路NF-κB、p38、JNK和ERK

3、激活情況。 結(jié)果：(1)TNF-α和IL-1β可以抑制FLS p53表達(dá)，并刺激FLS分泌IL-6、MMP-1顯著增加(P<0.001)；(2)p53 siRNA可以有效抑制FLS p53表達(dá)。在加或不加IL-1β刺激時，p53表達(dá)顯著下降的FLS分泌IL-6和MMP-1均較對照組顯著增加(P值均<0.05)；在IL-1β刺激下，p53 si RNA抑制p53引起P-IκBa、P-JNK和P-p38表達(dá)增高；(3)抑制p53引起

4、p21的表達(dá)隨之而下降；在IL-1β刺激下，p53低表達(dá)的FLS P-ERK較對照組增高。 結(jié)論：(1)FLS中p53缺陷對滑膜炎癥可以產(chǎn)生重要影響：抑制p53表達(dá)可以使NF-κB、p38、JNK活性顯著增高，進(jìn)而促進(jìn)FLS分泌促炎癥性細(xì)胞因子和MMPs，并且FLS p53缺陷可能對以上分子各自發(fā)揮功能存在易化作用；而促炎癥性細(xì)胞因子增高可進(jìn)一步抑制p53表達(dá)。由此構(gòu)成的反饋循環(huán)可能是RA進(jìn)展和維持的關(guān)鍵因素。(2)FLS中p5