結(jié)核桿菌對(duì)感染宿主巨噬細(xì)胞應(yīng)激的調(diào)控作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討研究不同毒力的結(jié)核分枝桿菌對(duì)感染宿主巨噬細(xì)胞應(yīng)激的調(diào)控作用及其機(jī)制。
　　方法:1、以結(jié)核分枝桿菌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株H37Rv菌株(簡(jiǎn)稱H37Rv菌株)和卡介苗菌株(簡(jiǎn)稱BCG菌株)分別感染小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7),在感染1、6、12及24小時(shí)后,分別采用化學(xué)比色法檢測(cè)各組感染巨噬細(xì)胞的超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的測(cè)定。2、采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)各組感

2、染巨噬細(xì)胞的Cu/Zn-SOD和iNOS蛋白的表達(dá)。3、采用RT-PCR方法檢測(cè)各組感染巨噬細(xì)胞的Cu/Zn-SOD和iNOS基因的表達(dá)(mRNA水平)。
　　結(jié)果:1、采用化學(xué)比色法檢測(cè)各組感染巨噬細(xì)胞的SOD和NOS活性及MDA和NO含量的測(cè)定:BCG菌株感染RAW264.7后細(xì)胞內(nèi)SOD、NOS活性和NO含量逐漸升高,而MDA含量逐漸下降,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);H37Rv菌株感染RAW264.7后細(xì)胞

3、內(nèi)SOD、NOS和NO含量逐漸下降,而MDA含量逐漸增加,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2、采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)各組感染巨噬細(xì)胞的Cu/Zn-SOD和iNOS蛋白的表達(dá):BCG菌株感染RAW264.7后細(xì)胞內(nèi)Cu/Zn-SOD表達(dá)逐漸升高,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);H37Rv菌株感染RAW264.7后細(xì)胞內(nèi)Cu/Zn-SOD表達(dá)逐漸下降,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?？瞻讓?duì)照組、BCG

4、菌株組、H37RV菌株組感染RAW264.7后細(xì)胞內(nèi)iNOS蛋白的表達(dá)無(wú)差異,為了進(jìn)一步研究不同毒力結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞的iNOS的蛋白表達(dá)差異,我們將對(duì)iNOS基因表達(dá)分析。3、采用RT-PCR方法檢測(cè)各組感染巨噬細(xì)胞的iNOS和Cu/Zn-SOD基因的表達(dá)(mRNA水平):BCG菌株感染RAW264.7后細(xì)胞內(nèi)Cu/Zn-SODmRNA和iNOSmRNA水平逐漸升高,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);H37Rv菌株感