結(jié)核桿菌對(duì)感染宿主巨噬細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌感染RAW264.7巨噬細(xì)胞的模型,探討不同毒力的結(jié)核分枝桿菌感染對(duì)巨噬細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　1.用結(jié)核分枝桿菌國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株H37Rv株和卡介苗BCG分別感染巨噬細(xì)胞RAW264.7株,同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組,在感染后1h、6h、12h及24h,用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)各組巨噬細(xì)胞的凋亡率,分析其時(shí)相性變化。
　　2.應(yīng)用Westernblot和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)上述各

2、組各時(shí)間點(diǎn)Caspase-3及Bcl-2蛋白表達(dá)水平(蛋白水平和基因水平)。
　　結(jié)果:
　　1.結(jié)核分枝桿菌感染組的凋亡率顯著高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);BCG感染組早期凋亡率高于H37Rv株感染組,在感染后1h、12h和24h凋亡率升高顯著,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞后,其Caspase-3蛋白表達(dá)增高,結(jié)核分枝桿菌感染組的Caspase-3蛋白表達(dá)高

3、于對(duì)照組,對(duì)照組　　3.結(jié)核分枝桿菌感染組Caspase-3基因相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);BCG感染組Caspase-3基因表達(dá)高于H37Rv株感染組,在感染后1h和24h表達(dá)顯著增高

4、,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.結(jié)核分枝桿菌感染組的Bcl-2蛋白表達(dá)低于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);H37Rv感染組在1h、6h和24h的Bcl-2蛋白表達(dá)高于BCG感染組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.結(jié)核分枝桿菌感染組Bcl-2基因相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);H37Rv株感染組Bcl-2基因表達(dá)高于BCG感染組,在感染后1h、12h和24h的

5、相對(duì)表達(dá)顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.巨噬細(xì)胞感染結(jié)核分枝桿菌后凋亡率增高,其凋亡與結(jié)核分枝桿菌的毒力強(qiáng)弱有關(guān),胞的凋亡水平存在差異,毒力弱的結(jié)核分枝桿菌感染的巨噬細(xì)胞早期凋亡顯著。
　　2.不同毒力的結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞的Caspase-3表達(dá)水平存在差異,弱毒力結(jié)核分枝桿菌感染的巨噬細(xì)胞早期的Caspase-3表達(dá)水平更顯著。
　　3.不同毒力的結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)