肌萎縮側(cè)索硬化脊髓內(nèi)源性神經(jīng)前體細(xì)胞的變化及其調(diào)控因子HoxB表達(dá)改變的研究.pdf

1、目的:
　　采用G93A-SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠作為肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)動(dòng)物模型,觀察分析正常生理?xiàng)l件下和ALS病理?xiàng)l件下成年小鼠脊髓神經(jīng)前體細(xì)胞(NPCs)的分布、增殖、遷移途徑和分化方向以及HoxB9的表達(dá)情況。
　　方法:
　　構(gòu)建 B6SJL-Tg(SOD1*G93A)1Gur/NJU轉(zhuǎn)基因小鼠動(dòng)物模型,用 PCR技術(shù)檢測和篩選轉(zhuǎn)基因小鼠動(dòng)物模型。采用熒光免疫組織化學(xué)雙標(biāo)記技術(shù),分別標(biāo)記NPCs、神經(jīng)元細(xì)胞、星

2、形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、HoxB9基因表達(dá)的細(xì)胞。每一解剖區(qū)同時(shí)進(jìn)行雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色,在顯微鏡下觀察,并用圖像處理技術(shù)將不同染色的陽性細(xì)胞兩兩疊加成像,觀察分析陽性細(xì)胞分布特征,計(jì)算各種陽性細(xì)胞數(shù)。并統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)解剖區(qū)NPCs、神經(jīng)元細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量及HoxB基因家族表達(dá)細(xì)胞類型和表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果:
　　1、正常成年小鼠脊髓組織內(nèi)存在NPCs,并主要分布于中央管周圍區(qū)域,而在灰質(zhì)區(qū)域內(nèi)少量散在分布。

3、不同節(jié)段間中央管周圍區(qū)域的NPCs在數(shù)量上存在頸段>腰段>胸段的規(guī)律。
　　2、在ALS病理狀態(tài)下發(fā)病后的小鼠脊髓內(nèi)存在NPCs的大量增殖,且在各個(gè)解剖區(qū)域均呈現(xiàn)出進(jìn)展組>起病組>未發(fā)病組的規(guī)律。
　　3、在ALS病理狀態(tài)下小鼠脊髓灰質(zhì)(灰質(zhì)前角、后角、側(cè)角區(qū)域)內(nèi)增殖的NPCs與Anti-GFAP antibody存在共免疫反應(yīng)性。提示增殖的NPCs主要分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞。
　　4、在正常和ALS病理狀態(tài)下的小鼠脊髓