漁用益生菌發(fā)酵工藝研究.pdf

1、自20世紀(jì)80年代以來，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，已從過去的粗放式養(yǎng)殖轉(zhuǎn)變?yōu)榧s化、高密度養(yǎng)殖。養(yǎng)殖戶由于盲目地追求經(jīng)濟(jì)利益，養(yǎng)殖密度過大，水體持續(xù)惡化，導(dǎo)致疾病爆發(fā)。在對待疾病問題上，養(yǎng)殖戶還是使用大量的抗生素類藥物，不僅使病原菌產(chǎn)生耐藥性，而且水產(chǎn)品的藥物殘留也會對人體產(chǎn)生危害。近年來，利用益生菌作為飼料添加劑和水質(zhì)改良劑以實現(xiàn)健康養(yǎng)殖和高產(chǎn)增收，已初見成效。益生菌制劑也極有可能取代抗生素類藥物，成為新型、綠色的水產(chǎn)動物保健品。隨著對

2、漁用益生菌作用機(jī)理研究的不斷深入，各類具有益生效果的菌種也不斷被發(fā)現(xiàn)，利用這些菌種進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，摸索最適合的生產(chǎn)工藝也成為漁用益生菌研究的一個新方向。
　　本研究首先在500 ml搖瓶條件下，選取從養(yǎng)殖水體中分離出的枯草芽孢桿菌B1884株和好氧反硝化細(xì)菌A762株為實驗菌株，以農(nóng)產(chǎn)品加工下角料和常見無機(jī)鹽為實驗原料，通過單因素試驗篩選出最適宜兩株菌生長的碳源、氮源和無機(jī)鹽，并通過正交設(shè)計試驗對碳氮源及無機(jī)鹽的配比進(jìn)行優(yōu)化，以確定

3、兩株菌的發(fā)酵培養(yǎng)基。單因素實驗結(jié)果表明:枯草芽孢桿菌1884株最優(yōu)碳源為麩皮，最優(yōu)氮源為花生粕，最優(yōu)無機(jī)鹽為KH2PO4，好氧反硝化細(xì)菌最優(yōu)碳源為糖蜜，最優(yōu)氮源為花生粕，最優(yōu)無機(jī)鹽為Na2HPO4。正交試驗結(jié)果表明:枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基成分的最優(yōu)配比為(g/L):麩皮5，花生粕15，KH2PO410;好氧反硝化細(xì)菌培養(yǎng)基成分的最優(yōu)配比為(g/L):糖蜜15，花生粕20，Na2HPO410。
　　在培養(yǎng)基成分及配比確定后，在500 m

4、l搖瓶條件下對溫度、初始pH、初始接種量、裝液量、搖床轉(zhuǎn)速這些發(fā)酵條件進(jìn)行摸索，最終確定最優(yōu)的發(fā)酵條件如下:枯草芽孢桿菌B1884:培養(yǎng)溫度38℃，初始pH為7.0，初始接種量3‰裝液量150 ml，搖床轉(zhuǎn)速220r/min;好氧反硝化細(xì)菌A762:培養(yǎng)溫度28℃，初始pH為6.5，初始接種量5％，裝液量150ml，搖床轉(zhuǎn)速300 r/min。經(jīng)培養(yǎng)基與發(fā)酵條件優(yōu)化后，枯草芽孢桿菌B1884在搖瓶培養(yǎng)條件下培養(yǎng)48 h，菌濃度達(dá)到1.1

5、1×1010 CFU/ml，芽孢數(shù)量達(dá)到9.33×109 CFU/ml，芽孢產(chǎn)率為84.05％。好氧反硝化細(xì)菌A762在搖瓶條件下培養(yǎng)96 h菌濃度達(dá)到1.28×1010CFU/ml。
　　經(jīng)搖瓶條件下優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件后，采用5L發(fā)酵罐進(jìn)行小試以驗證優(yōu)化體系的可行性，枯草芽孢桿菌B1884株發(fā)酵24 h菌濃度達(dá)到7.95×1010 CFU/ml，芽孢數(shù)量達(dá)到7.12×1010 CFU/ml，芽孢產(chǎn)率為89.6％，好氧反硝化