轉(zhuǎn)座子在耐多藥產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中的分布性探討.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)座子在耐多藥產(chǎn)ESBLs酶大腸埃希菌中的分布及耐藥相關(guān)性。
　　方法:1.初篩試驗(yàn):根據(jù)美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(TheNationalCommitteeforclinicalLaboratoryStandards,NCCLS)推薦的紙片擴(kuò)散法(kerby-Bauer紙片擴(kuò)散法)[1]檢測(cè)71株大腸埃希菌中頭孢噻肟(CTX)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢曲松(CS)、氨曲南(AZT)的耐藥性,即抑菌環(huán)直徑≤22mm的為

2、頭孢他啶;抑菌環(huán)直徑≤25mm的為頭孢曲松;抑菌環(huán)直徑≤27mm的為氨曲南或頭孢噻肟;所符合以上標(biāo)準(zhǔn)的定為初篩可疑產(chǎn)ESBLs菌株。2.紙片確認(rèn)試(Confirmatorytests)[2]:對(duì)紙片擴(kuò)散法所得可疑ESBLs菌株,同時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn),每一組藥物中加入頭孢他啶加克拉維酸和頭孢他啶、頭孢噻肟加克拉維酸和頭孢噻肟,觀察在加克拉維酸前后的抑菌環(huán)直徑變化≥5mm可確認(rèn)為產(chǎn)ESBLs菌株。3.藥敏試驗(yàn):采用NCCLS推薦的紙片擴(kuò)散法(K

3、erby-Bauer法,K-B法)[3],首先采用對(duì)大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922進(jìn)行質(zhì)控,再對(duì)選定的三類(lèi)中共6種常用抗菌藥物:頭孢噻肟(CTX)、鏈霉素(S)、阿米卡星(A)、左氧氟沙星(LEV)、環(huán)丙沙星(CIP)、頭孢西丁(F0X)在71株大腸埃希菌耐藥性分別進(jìn)行測(cè)定。4.PCR技術(shù):大腸埃希菌的DNA,采用Biospin細(xì)菌基因組DNA試劑盒所提取。根據(jù)已知的轉(zhuǎn)座子Tn21、Tn501、Tnl、Tn2、Tn3、Tnl000

4、、Tn1548分別設(shè)計(jì)七對(duì)引物,在所得到轉(zhuǎn)座子遺傳標(biāo)記物為陽(yáng)性的菌株中以大腸埃希菌DNA為反應(yīng)模板分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增,陽(yáng)性擴(kuò)增長(zhǎng)度分別為:Tn21為317bp;Tn501為373bp;Tnl為497bp;Tn2為479bp;Tn3為323bp;Tn1000為372bp;Tn1548為497bp;將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳、紫外線檢測(cè)儀觀察結(jié)果。5.基因測(cè)序:分別提取所測(cè)轉(zhuǎn)座子DNA擴(kuò)增陽(yáng)性的菌株的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用核酸定量?jī)x測(cè)得DNA濃

5、度>300ug/ml,并送至上海生工生物技術(shù)公司進(jìn)行基因測(cè)序[4]。
　　結(jié)果:1.產(chǎn)ESBLs菌株:在71株大腸埃希菌中通過(guò)紙片法初篩后再行確認(rèn)試驗(yàn),共檢出產(chǎn)ESBLs34株(49.30％)。2.藥敏結(jié)果:6種抗生素的敏感性在71株大腸埃希菌中全部分布為:耐多藥45株(63.38%)、雙耐8株(11.27%)、單耐11株(15.49%)、全敏感7株(9.86%)。3.轉(zhuǎn)座子的檢出情況:71株細(xì)菌中含轉(zhuǎn)座子Tn21、轉(zhuǎn)座子Tn50

6、1陽(yáng)性菌共15株,轉(zhuǎn)座子Tnl、Tn2、Tn3、Tnl000、Tn1548均未檢出。3.1轉(zhuǎn)座子在不同耐藥模式中的分布:45株耐多藥菌株含耐多藥轉(zhuǎn)座子菌株13株(28.89%),8株雙耐藥菌株含轉(zhuǎn)座子雙耐藥菌株1株(12.50%),11株單耐藥菌株含轉(zhuǎn)座子單耐藥菌株1株(9.09%),7株敏感耐藥模式中未檢出。整體比較CMHX2=4.56p=0.032;耐多藥與(雙耐藥+單耐藥+全敏感)比較X2=4.44p=0.0350。3.2轉(zhuǎn)座子在

7、產(chǎn)ESBLs酶菌株與非產(chǎn)ESBLs酶中的分布:35株產(chǎn)酶菌含轉(zhuǎn)座子的14株(40%),36株非產(chǎn)酶菌含轉(zhuǎn)座子的4株(11.11%);該組X2=10.372p=0.001。3.3不同轉(zhuǎn)座子模式在各種耐藥模式中的分布:轉(zhuǎn)座子Tn21檢出7株,其中耐多藥6株(85.71%)、雙耐0株(0%)、單耐1株(12.5%);轉(zhuǎn)座子Tn501檢出5株,耐多藥4株(80%);雙耐1株(20%)Tn21與Tn501重疊3株(100%),均為耐多藥;3.4不

8、同轉(zhuǎn)座子模式在產(chǎn)ESBLs酶菌株與非產(chǎn)ESBLs酶中的分布:轉(zhuǎn)座子Tn21檢出7株,其中產(chǎn)ESBLs酶菌株7株(100%),非產(chǎn)ESBLs酶0(0%)株;轉(zhuǎn)座子Tn501檢出5株,其中產(chǎn)ESBLs酶菌株1(20%)株,非產(chǎn)ESBLs酶4株(80%);Tn21與Tn501重疊3株,其中產(chǎn)ESBLs酶菌株3株(100%),非產(chǎn)ESBLs酶未檢出;該組整體比較X2=10.909p=0.004,轉(zhuǎn)座子在產(chǎn)酶菌株中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.5轉(zhuǎn)座子Tn

9、21與Tn501分別在耐藥模式中的分布:轉(zhuǎn)座子Tn21檢出10株中耐多藥9株(90%)、單耐藥1株(10%)、雙耐藥與全敏模式均為檢出;轉(zhuǎn)座子Tn501檢出8株中耐多藥7株(87.5%)、雙耐藥1株(12.5%);全敏與單耐模式均未檢出。3.6轉(zhuǎn)座子Tn21與Tn501分別在ESBLs酶與非產(chǎn)ESBLs酶中的分布:轉(zhuǎn)座子Tn21檢出10株,產(chǎn)酶10(100%)株、非產(chǎn)酶0株;轉(zhuǎn)座子Tn501檢出8株,產(chǎn)酶4株(50%)、非產(chǎn)酶4株(50