MTHFR基因G1793A多態(tài)性與大腸癌中TopoⅡ表達(dá)的相關(guān)性.pdf

1、目的:
　　大腸癌是目前死亡率較高的惡性腫瘤[1],近幾年其發(fā)病率和死亡率逐漸上升,并且發(fā)病年齡有年輕化趨勢。化療在大腸癌中有著不可替代的重要作用,尤其對于失去手術(shù)機(jī)會的晚期大腸癌患者來說,化療可能是其唯一治療手段。雖然不斷研制出新的化療藥物,然而治療結(jié)果卻不盡如人意,給患者帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和痛苦。近年來研究證實,多藥耐藥基因(multi-drug resistance,MDR)表達(dá)產(chǎn)物DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(TopoⅡ)是造成大

2、腸癌化療失敗以及早期復(fù)發(fā)的主要原因,是形成化療耐藥性的物質(zhì)基礎(chǔ)。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(DNA topoisomeraseⅡ,TopoⅡ)既是某些細(xì)胞毒藥物作用的靶點,又是多藥耐藥的重要靶酶,介導(dǎo)多種化療藥物的MDR。由TopoⅡ介導(dǎo)的耐藥細(xì)胞無MDR基因的擴(kuò)增與過量表達(dá),為導(dǎo)致多藥耐藥形成的重要途徑。因此研究大腸癌患者組織中 TopoⅡ的表達(dá)情況與大腸癌臨床病理學(xué)特征之間的關(guān)系有十分重要的臨床意義。目前報道了幾種亞甲基四氫葉酸還原酶(MT

3、HFR)基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP),其中MTHFR G1793A是亞甲基四氫葉酸還原酶基因新近發(fā)現(xiàn)的一個多肽位點,它是 MTHFR基因1793位的堿基鳥嘌呤(G)被腺嘌呤(A)替換,從而使密碼594上的精氨酸被谷氨酰氨替換,與大腸癌有著密切的關(guān)系。我們試圖通過研究確定亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因 G1793A多態(tài)性與該患者大腸癌組織中多藥耐藥基因(MDR)的表達(dá)產(chǎn)物TopoⅡ表達(dá)之間的關(guān)系,闡明MTHFR基因G1793A多

4、態(tài)性與大腸癌化療敏感性最關(guān)鍵的因素 TopoⅡ之間的關(guān)系,旨在尋找到早期預(yù)測大腸癌化療敏感性的指標(biāo),為臨床制定個體化的化療方案提供有益的信息。
　　方法:
　　用免疫組織化學(xué)方法(S-P)檢測95例患者大腸癌組織中TopoⅡ的表達(dá)情況,并分析其與大腸癌各臨床病理學(xué)特征(包括性別、年齡、腫瘤大小、發(fā)病部位、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Duke’s分期)的關(guān)系,探討TopoⅡ在大腸癌發(fā)展中的作用。同時我們獲取所有95例大腸癌患者手

5、術(shù)后的切除標(biāo)本,-80℃保存,用TIANamp Genomic DNA提取試劑盒提取大腸癌組織中的DNA,然后用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析技術(shù)檢測95例患者M(jìn)THFR基因G1793A的基因型,并分析MTHFR基因G1793A基因型與TopoⅡ表達(dá)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　PCR-RFLP分析技術(shù)結(jié)果顯示:95例大腸癌患者中,70例(73.68％)為G/G基因型,25例(26.31%)為G/

6、A基因型,未看見A/A基因型。免疫組化結(jié)果顯示:在95例大腸癌患者中,TopoⅡ表達(dá)陽性的有55例,陽性表達(dá)率為57.90%(55/95);大腸癌中TopoⅡ的表達(dá)與患者性別、腫瘤大小、發(fā)病部位、分化程度、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05);但與年齡有關(guān),年齡≥60歲的患者,其TopoⅡ的陽性表達(dá)率明顯高于年齡<60歲的患者(P<0.01)。其中,在70例MTHFR G1793A G/G基因型患者中,TopoⅡ表達(dá)陽性的有50

7、例,其陽性表達(dá)率為71.43%(50/70);在25例MTHFR G1793A G/A基因型患者中,TopoⅡ表達(dá)陽性的有7例,其陽性表達(dá)率為28.00%(7/25);所檢測的95例大腸癌患者中,MTHFR G1793A G/G基因型的患者TopoⅡ的陽性表達(dá)率(71.43%)顯著高于MTHFR G1793A G/A基因型患者的(28.00%)(χ2=4.22,P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.大腸癌患者組織中TopoⅡ

8、的表達(dá)與患者性別、腫瘤大小、發(fā)病部位、分化程度、臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05);但與年齡有關(guān),年齡≥60歲的患者TopoⅡ的陽性表達(dá)率明顯高于年齡<60歲的患者(P<0.01)。
　　2. MTHFR G1793A G/G基因型與大腸癌組織中TopoⅡ的表達(dá)呈正相關(guān),因此檢測大腸癌患者M(jìn)THFR G1793A的基因型可以預(yù)測該患者對化療的敏感程度。MTHFR G1793A G/G基因型患者可能對化療敏感,可能成為早期