木豆葉中木豆素的提取純化工藝及其抗菌活性研究.pdf

1、本文首次研究了木豆葉中木豆素（化學(xué)名:3-羥基-4-異戊二烯基-5-甲氧基芪-2-羧酸;簡寫HPMSCA）的微波輔助提取工藝，并利用大孔吸附樹脂、柱色譜和重結(jié)晶等多種方法對木豆葉中木豆素的純化工藝條件進行了系統(tǒng)的研究。同時，對木豆素的抗菌活性進行了初步探討。結(jié)果如下：
　　1.首次確定了反相高效液相—二極管陣列檢測器方法測定木豆葉中木豆素的條件:色譜柱:Symmetry ShieldTM RP18，150 mm×3.9 mm，5μ

2、m;流動相:甲醇-水-甲酸(80∶19.9∶0.1，v/v/v);流速:1.0 mL/min;進樣量:10μL;檢測波長:259.2 nm;柱溫:35℃。
　　結(jié)果顯示該方法的精密度和重復(fù)性的R.S.D.均小于3％。
　　2.首次確立了微波輔助提取木豆葉中木豆素的最佳提取工藝參數(shù):
　　儀器功率:300W
　　原料粒徑:≤0.5 mm
　　提取溶劑:80％乙醇
　　液固比以及提取次數(shù):30∶1，提取2

3、次
　　提取溫度:65℃
　　提取時間:1 min
　　在上述微波輔助提取條件下，木豆素能夠被快速高效地從原料中提取出來，木豆素的提取率可達19.00 mg/g，在浸膏中含量為6.124％。
　　3.首次確立了木豆葉中木豆素的最佳純化工藝:
　　(1)采用NKA-9型大孔吸附樹脂富集木豆素:
　　以30％乙醇為上樣溶液，木豆素濃度0.039 mg/mL，上樣流速為1.5 BV/h，上樣量為3 BV/1

4、00g干樹脂;以85～90％乙醇為解吸液，解吸流速為2 BV/h，解吸液體積為5BV/100g干樹脂。
　　經(jīng)過NKA-9型大孔吸附樹脂在此條件下富集后，木豆素含量提高至18.4％，提高了3倍，此過程收率為69.15％。
　　(2)采用連續(xù)中壓正相柱層析技術(shù)從樹脂富集后的樣品中分離木豆素:
　　硅膠規(guī)格為300～400目;上樣量與硅膠量比為1∶4;以三氯甲烷-石油醚(10～15∶1，v/v)為洗脫劑、以10 mL/mi

5、n的流速進行梯度洗脫，得到含量為52.19％的木豆素粗品，收率為:73.35％。
　　(3)利用反相ODS中壓硅膠柱層析分離結(jié)合重結(jié)晶技術(shù)對木豆素粗品進行純化:
　　上樣量與反相ODS硅膠量比為1∶100;流動相為甲醇-水-甲酸(76.5∶23.2∶0.3，v/v/v);結(jié)晶溶劑為甲醇，重結(jié)晶溶劑為三氯甲烷/石油醚。最終，得到純度≥93％的木豆素白色粉末，回收率為62.82％。
　　木豆素純化的全過程總收率為:31.8

6、6％。
　　4.通過木豆素抗菌活性研究，表明木豆素對一種革蘭氏陰性菌:普通變形桿菌以及三種革蘭氏陽性菌:表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的抗菌活性較強，抑菌直徑分別為15 mm，18 mm，20 mm和15.5 mm，相應(yīng)的MIC為:25μg/mL，MBC為50μg/mL。對其他的革蘭氏陰性菌:大腸桿菌和綠膿桿菌抑菌直徑仍為6 mm，MIC和MBC均大于200μg/mL。在最大濃度200μg/mL時，木豆素對白色念珠球菌