負(fù)壓空化輔助雙水相提取富集木豆葉中四種主要成分工藝研究.pdf

1、木豆是常見的主要食用豆類作物之一，其主要成分有黃酮類和芪類化合物，據(jù)報道這些化合物的藥理作用很廣泛，包括抗炎、抗病毒、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞等。本研究建立了HPLC對木豆葉中主要活性成分木豆芪酸、木豆素C、球松素及球松素查爾酮的定量分析方法;分別優(yōu)化了負(fù)壓空化和負(fù)壓空化輔助雙水相法(NPC-ATPE)提取工藝參數(shù)，最終建立了NPC-ATPE提取富集木豆葉中的木豆芪酸、木豆素C、球松素及球松素查爾酮優(yōu)化生產(chǎn)工藝，主要研究結(jié)果如下:
　

2、　1.木豆芪酸、木豆素C、球松素以及球松素查爾酮分析方法的建立:
　　色譜柱:HIQ sil C18W(5μm，250 mm×4.6 mm i.d.)，流動相組成確定為0.1％甲酸水溶液(A)-甲醇(B)，梯度洗脫條件:0-15 min，77-80％(B);15-20 min，80-90％(B);20-22 min，90-100％(B)。流速:1.0 mL/min，檢測波長:287.6nm，341.1 nm，298.3 nm及25

3、8.0 nm，進(jìn)樣量:5μL，柱溫:30℃。保留時間分別為6.908，8.039，14.523，19.720 min。
　　在此檢測條件下所建立的方法，目標(biāo)化合物線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2均大于或等于0.9988。HPLC分析方法的精密度和重復(fù)性R.S.D.均小于5％，穩(wěn)定性R.S.D.小于5％，加樣回收率在97.36％-101.82％之間，R.S.D.小于4％。
　　2.確定了負(fù)壓空化提取木豆葉中目標(biāo)成分的最佳工藝參數(shù):<

4、br>　　提取固液比:1∶50(g/g)
　　提取時間:3 min
　　提取負(fù)壓:-0.07 MPa
　　提取溫度:30℃
　　乙醇濃度:80％(v/v)
　　在上述優(yōu)化的條件下，木豆芪酸、木豆素C、球松素以及球松素查爾酮的提取率分別為9.35mg/g,4.56 mg/g，4.01 mg/g和0.452mg/g。目標(biāo)成分的純度分別為2.254％，0.943％，0.906％以及0.426％。
　　3.在

5、上述優(yōu)化的負(fù)壓空化工藝參數(shù)下，建立并優(yōu)化雙水相體系，具體參數(shù):
　　乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù):23％
　　硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù):21％
　　溫度:35℃
　　負(fù)壓空化輔助雙水相提取富集木豆葉中木豆芪酸、木豆素C、球松素及球松素查爾酮的平均提取率分別為10.175、5.162、4.925、0.523 mg/g(n=3)。目標(biāo)成分的純度分別達(dá)到4.557％，2.204％，2.072％以及0.873％，與以乙醇為提取溶劑的負(fù)壓空化提取方

6、法比較，四種化合物的純度均提高了2倍以上。
　　4.不同提取方法粗提物抗氧化活性的對比:
　　本研究采用DPPH、ABTS和FRAP分別對不同提取方法粗提物進(jìn)行抗氧化活性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下:NPC-ATPE粗提物的IC50和TEAC值分別為0.337 mg/mL,0.1511mmol/g、0.2661 mmol/g。結(jié)果表明，該方法能夠有效的增強(qiáng)木豆葉粗提物的抗氧化活性。
　　本研究結(jié)果表明，與傳統(tǒng)提取方法相比，這種提取新