犬問(wèn)荊中主要黃酮成分的提取和富集工藝研究.pdf

1、在本實(shí)驗(yàn)中采用低共熔溶劑作為新型的提取溶劑對(duì)中藥材犬問(wèn)荊中主要黃酮類成分山奈酚-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖進(jìn)行綠色高效提取，同時(shí)結(jié)合大孔吸附樹脂進(jìn)行分離和富集。研究了負(fù)壓空化輔助低共熔溶劑提取的工藝，并對(duì)工藝參數(shù)進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化，建立了一套快速簡(jiǎn)便的HPLC分析檢測(cè)方法和高效的富集分離工藝。結(jié)果如下：
　　1.建立了山奈酚-3，

2、7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷四種黃酮化合物的HPLC-UV分析檢測(cè)方法:
　　色譜條件:色譜柱:Curosil-PFP column(5μm，250×4.6 mm i.d.);流動(dòng)相:0.10％甲酸水溶液(A)-甲醇(B);柱溫30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)349.4 nm，341.1 nm，344.2 nm，330.4nm;流速1 mL/m

3、in;進(jìn)樣量5μL;梯度洗脫條件:0-10 min，33-33％ B;10-12 min，33-36％ B;12-20 min,36-36％ B;20-22 min,36-44％ B;22-36 min,44-44％ B;36-40min,44-51％ B;40-50 min,51％-75％ B。
　　2.對(duì)犬問(wèn)荊中四種黃酮化合物山奈酚-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-

4、葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷的提取的工藝參數(shù)進(jìn)行了Box-Behnken Design(BBD)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和工藝優(yōu)化，確定了最優(yōu)的負(fù)壓空化輔助低共熔溶劑提取的參數(shù):
　　低共熔溶劑:氯化膽堿/甜菜堿鹽酸鹽-乙二醇（摩爾比1∶1∶2，含水量20％）
　　負(fù)壓空化提取工藝參數(shù):提取壓力:-0.07 Mpa
　　提取溫度:63℃
　　液固比:27 mL/g
　　提取時(shí)間:20 min
　　在上述

5、優(yōu)化條件下進(jìn)行了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，四種黃酮化合物山奈酚-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷的平均提取率分別為4.85 mg/g、3.94 mg/g、1.95 mg/g、3.95 mg/g(n=3)，提取率優(yōu)于使用負(fù)壓空化輔助80％乙醇溶劑提取和超聲輔助低共熔溶劑提取的提取效率。
　　3.采用NKA-9、AB-8和HPD-826型號(hào)大孔吸附

6、樹脂直接富集分離低共熔溶劑提取液中黃酮類成分，其中HPD-826樹脂總體回收率最高，對(duì)山余酚-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、芫花素-5-O-β-D-葡萄糖苷四種黃酮類成分的回收率為67.76％、64.40％、89.79％、79.17％，并且通過(guò)HPD-826樹脂分離后四種成分含量為3.51％、2.71％、1.87％、3.34％。
　　綜上所述，負(fù)壓空化輔助低