RL95--2--BeWo共培養(yǎng)體外著床模型的建立及粘附--植入功能的多因素調(diào)節(jié).pdf

1、RL952BeWo共培養(yǎng)體外著床模型的建立及粘附一植入功能的多因素調(diào)節(jié)三RL952BeWo共培養(yǎng)體外著床模型的建立及粘附一植入功能的多因素調(diào)節(jié)中文摘要目的建立一種理想的體外共培養(yǎng)胚胎著床模型，研究不同濃度的雌二醇(E2)、孕酮(P4)和肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子(HB—EGF)的刺激對(duì)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞整合素p3及其配體骨橋蛋白表達(dá)的影響，以及對(duì)共培養(yǎng)模型粘附和鋪展能力的影響，初步探討該模型在胚胎粘附一植入方面的多因素調(diào)節(jié)。方法1、建立RL95

2、2BeWo共培養(yǎng)體外著床模型將人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株RL952制成單層細(xì)胞用于模擬子宮內(nèi)膜上皮，通過無(wú)血清培養(yǎng)和低吸附培養(yǎng)皿將人絨毛膜癌細(xì)胞株BeWo制成球狀體用于模擬胚胎，將兩者共培養(yǎng)模擬胚胎著床過程，觀察形態(tài)并計(jì)算球狀體粘附率(本實(shí)驗(yàn)以在澳大利亞亨利王子研究所PHI培訓(xùn)期間所做的球狀體形態(tài)和粘附率作為對(duì)照)。2、多因素調(diào)節(jié)RL952BeWo共培養(yǎng)體外著床模型粘附一植入功能：(1)粘附因子整合素133及其配體OPN檢測(cè)通過間接免疫熒光技術(shù)

3、檢測(cè)RL952單層細(xì)胞、BeWo單層細(xì)胞和BeWo球狀體整合素p3及OPN的定位表達(dá)；用不同濃度的E2、P4、E2P4及HBEGF處理RL952細(xì)胞，通過實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)比較各組整合素p3及OPN的mRNA表達(dá)水平。(2)粘附實(shí)驗(yàn)和鋪展實(shí)驗(yàn)用不同濃度的E2、P4、E2P4及HBEGF處理RL952細(xì)胞后與BeWo球狀體共培養(yǎng)，比較各組球狀體粘附率；用高濃度E2、P4及HBEGF分別處理RL952細(xì)胞后與BeWo球狀體共培養(yǎng)，第1h和第

4、24h時(shí)拍照并測(cè)量球狀體的直徑，比較各組球狀體鋪展倍數(shù)。結(jié)果1、建立RL952BeWo體外共培養(yǎng)模型，本實(shí)驗(yàn)組改良方法制備的BeWo球狀體與PHI在形態(tài)和粘附率上無(wú)明顯差異(PO05)。2、整合素p3和OPN在RL952單層細(xì)胞、BeWo單層細(xì)胞和BeWo球狀體的細(xì)胞質(zhì)和膜表面表達(dá)。3、E對(duì)RL952細(xì)胞的整合素p3和OPNmRNA的表達(dá)無(wú)明顯影響(PO05)；高濃度RL95—2BeWo共培養(yǎng)體外著床模型的建立及粘附一植入功能的多因素調(diào)

5、節(jié)三Abstractobjeetive：ThisstudyaimedtoestablishalleffectiveinvitroCOculturemodelofembryOimplantation，andpreliminarilydiscussedtheadhesiveandembedfunctionofthismode1bydetectingtheexpressionofintegrinl33anditsligindosteopont

6、ininendometrialepitheliumcells，aswellasspheroidsadhesionandexpansionindexesundertheregulationofestradiol(E2)，progesterone(P4)andheparinbindingepidermalgrowthfactor(HBEGF)Methods：1ToestablishaninvitroCO—culturemodelofembr

7、yoimplantation：endometrialepithelialcarcinomacellsRL952monolayerswereusedtomimicEndometrialepithelium，choriocarcinomaBeWocellswereformedofspheroidstomimicembryosbythewaysofserum—freeculturingandlowadsorptionpetridish，RL9

8、52monolayerandBeWospheroidswereCO—culturedtoimitateembryoimplantationprocessWeobservedthemorphologyandcalculatedadhesionrateofBeWospheroids，comparedthesameindexeswitllthetrialsinthetrainingofAustraliaPrinceHenry’sInstitu

9、te(PHI)2ToinvestigatemultielementregulationoftheadhesiveandembedrunionofRL952BeWoinvitrococulturemodel：(1)Detectingintegrinl33anditsligindOPNrelatedtoembryoadhesion：Thelocalizationofintegrinl33andOPNinRL952monolayerBeWom

10、onolayerandBeWospheroidsweredetectedbyimmunofluorescenceRL952cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofE2、P4、E2P4andHB—EGFthemRNAexpressionsofintegrinl33andOPNwereanalyzedbyrealtimePCR(2)BeWospheroidsattachmentassayan

11、doutgrowthassayRL952monolayerweretreatedwithdifferentconcentrationsofE2、P4、E2P4andHBEGFandCO—culturedwithBeWospheroids，comparedadhesionrateofeverygroupRL952monolayerweretreatedwimllighconcentrationsofE2、P4、E2P4andHBEGFan