運(yùn)用第二代測(cè)序技術(shù)對(duì)母體血漿中胎兒游離DNA進(jìn)行β地中海貧血無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的應(yīng)用性研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 1 級(jí)博士學(xué)位論文運(yùn)用第二代測(cè)序技術(shù)對(duì)母體血漿中胎兒游離D N A進(jìn)行D 地中海貧血無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的應(yīng)用性研究D e v e l o p m e n to f a N o n - I n v a s i v e P r e n a t a l D i a g n o s t i cT e s tf o rB e t a - - T h a l a s s a e m i aU s i n g C e l l &#

2、183;·f r e eF e t a l D N A課題來源： 白選專 業(yè) 名 稱學(xué)位申請(qǐng)人指 導(dǎo) 教 師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員論文評(píng)閱人婦產(chǎn)科學(xué)熊麗鐘梅教授張建平教授陳敦金教授肖小敏教授余艷紅教授張鎮(zhèn)海教授2 0 1 4 年5 月8 日 廣州中文摘要中海貧血基因攜帶者的孕婦進(jìn)行地貧基因產(chǎn)前診斷( p r e n a t a l d i a g n o s i s ) ，可有效預(yù)防地貧患兒的出生。產(chǎn)前診斷是現(xiàn)代遺傳病診

3、斷的重點(diǎn)，也是臨床產(chǎn)科學(xué)的重要組成部分，是通過物理、生化和遺傳等診斷技術(shù)和方法，對(duì)胎兒的遺傳狀況進(jìn)行診斷，其主要目的在于為遺傳病風(fēng)險(xiǎn)家庭提供充足可靠的信息，使他們?cè)谌焉锲谧龀鲞m當(dāng)?shù)倪x擇。侵入性方法是獲取胎兒物質(zhì)最直接的方法，是目前產(chǎn)前診斷廣泛使用的方法之一，主要通過羊膜腔穿刺術(shù)、絨毛取樣術(shù)、臍靜脈血取樣術(shù)等方式獲取到充足的胎兒物質(zhì)用于遺傳學(xué)檢測(cè)，但存在流產(chǎn)( O ．2 ％一3 ％) ，絨毛膜炎，羊水滲漏，穿刺部位出血、感染，胎兒心動(dòng)過緩

4、，胎膜早破等手術(shù)并發(fā)癥，增加孕婦風(fēng)險(xiǎn)同時(shí)加重孕婦及家屬焦慮情緒。因此大力發(fā)展無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷技術(shù)是臨床醫(yī)務(wù)工作者和科學(xué)研究者共同努力的方向。從2 0 0 7 年發(fā)現(xiàn)母體血漿中存在胎兒游離D N A 至今，B 地中海貧血作為常染色體隱性遺傳性疾病的常見病之一被學(xué)者做為單基因疾病模型進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的方法學(xué)研究。最初采用飛行質(zhì)譜、A S - P C R 等方法針對(duì)父母攜帶不同突變的胎兒進(jìn)行父源性突變等位基因排除性診斷，但該方法存在局限性：(

5、 1 ) 不能對(duì)攜帶了父源性突變等位基因的胎兒行進(jìn)一步的診斷。( 2 ) 不能針對(duì)雙親攜帶相同突變的胎兒進(jìn)行診斷。隨著數(shù)字化P C R 、液滴數(shù)字化P C R 以及第二代測(cè)序等絕對(duì)定量技術(shù)的出現(xiàn)，及相對(duì)突變劑量( R M D ) 這一理論的提出，推進(jìn)了單基因疾病的無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的發(fā)展，使得從c f D N A 中鑒別胎兒是否遺傳了母源性突變位點(diǎn)成為現(xiàn)實(shí)。目前研究利用S N P 的特點(diǎn)，通過父母具有不同信息的S N P s 位點(diǎn)進(jìn)行R M