地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷

1、? 和 ? 地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷Genetic Screening and Prenatal Diagnosis for? and ? thalassemia in Guangdong Meizhou 2006, December 07徐湘民南方醫(yī)科大學(xué)，醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室南方醫(yī)院產(chǎn)前診斷和遺傳病診斷技術(shù)中心Southern Medical University,,地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一

2、,,,中國(guó)南方不同高發(fā)地區(qū)人群攜帶率 1 ~ 23%,研究背景,中國(guó)南方α和β地貧的人群攜帶率,珠海,韶關(guān),廣州,汕頭,湛江,廣東省五個(gè)地區(qū)地中海貧血遺傳流行病學(xué)調(diào)查,西,南,東,北,中,Journal of Clinical Pathology, 2004; 57(5):517-22.,,廣東省人群中?地貧的攜帶者頻率,廣東省人群中β地貧的攜帶者頻率,廣東省年高風(fēng)險(xiǎn)妊娠預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)（95%CI） ? 重型或中間型β地貧： 645

3、 （480，835） ? Bart’s胎兒水腫綜合征：1714 （1498，1945） ? 血紅蛋白（Hb）H ?。?1677 （1467，1901）,廣州市主要出生缺陷的發(fā)生率 (1998-2001),地貧純合子：致死性出生缺陷,重型?地貧:胎兒水腫綜合征 ? 早產(chǎn)死胎或出生前后死亡 ? 可導(dǎo)致嚴(yán)重產(chǎn)科并發(fā)癥 ? 無理想治療方法,重型?地貧 ? 出生后1年內(nèi)發(fā)病 ? 多于未成年前因嚴(yán)重貧血而夭折 ? 輸血

4、和去鐵治療可維持,代價(jià)昂貴,研究地中海貧血的意義 ? 重癥地貧患兒的出生是世界公認(rèn)的公共衛(wèi)生問題 ? 通過產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是首選預(yù)防措施 ? WHO優(yōu)先推薦在發(fā)展中國(guó)家實(shí)施預(yù)防的遺傳性疾病 ? 預(yù)防地貧是中國(guó)南方高發(fā)區(qū)減少出生缺陷的戰(zhàn)略需求,研究背景,應(yīng)用于地貧 控制的人群篩查策略 ? 基于醫(yī)院水平的預(yù)防計(jì)劃 ? 基于社區(qū)水平的預(yù)防計(jì)劃 ? 擴(kuò)展的家系篩查計(jì)劃,,中國(guó)南方地貧人群

5、預(yù)防的首個(gè)前瞻性篩查計(jì)劃,? 時(shí)間：1993.01.01 ~ 2003.12.31 ? 基于醫(yī)院的預(yù)防計(jì)劃: 廣州市婦嬰醫(yī)院 占廣州市出生數(shù)的 1 / 17 ? 策略：孕期雜合子篩查 ? 結(jié)合現(xiàn)行的孕期健康產(chǎn)科檢查實(shí)施,地貧攜帶者篩查及產(chǎn)前診斷流程,篩查結(jié)果,異常血紅蛋白篩查結(jié)果,廣州市婦嬰醫(yī)院 1993-2003 篩查計(jì)劃的結(jié)果,( cont’d ),篩查發(fā)現(xiàn)的陽性孕婦或陽性夫婦 ? 地貧1

6、 β地貧 ?地貧 β地貧 5.7% 3.6% 4.4% 1.8%,Total of 4503 couples screened,,,,54例Bart’s水腫兒和Hb H病,,,,,,18例重型β地貧,2804 1783 198對(duì) 83對(duì),產(chǎn)前診斷：187 例 ?地貧 82例 β地貧,廣州市婦嬰醫(yī)院 1993-2003

7、篩查計(jì)劃的結(jié)果,產(chǎn)前診斷結(jié)果,地中海貧血的產(chǎn)前診斷,? 胎兒取樣技術(shù)? DNA診斷技術(shù) ?-地貧的診斷 ?-地貧的診斷,羊膜穿刺 (amniocentesis) 抽取胎兒樣品示意圖,DNA診斷技術(shù),? 多重PCR （multiplex PCR）? 等位基因特異性性寡核苷酸雜交（ASO）? 反向點(diǎn)雜交 （RDB）? 變性高效液相色譜（DHPLC）? 多重引物延伸DHPLC（multipl

8、ex PE / DHPLC）,用于 α和 β地貧產(chǎn)前診斷的方法 (1993-2003 ),胎兒臍帶血血紅蛋白電泳圖譜,DiagnosisPatient 1 Bart’s hydrops fetalisPatient 2 Hb H diseasePatient 3 ? thal trait,本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的主要技術(shù),采用Gap-PCR進(jìn)行--SEAα地貧基因缺失的基因分型,--SEAα地貧缺失的基因分型結(jié)果,,與美國(guó)商品化

9、UBI試劑盒的對(duì)比研究,中國(guó)南方β地貧突變的變異類型和位置,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,EXON 1,IVS 1,EXON 2,EXON 3,,IVS 2,,,,,? Fragment size: A = 453 bp B = 364 bp C = 423 bp

10、 ? One set of PCR conditions,DHPLC 分析人β珠蛋白基因: 三個(gè)PCR片段擴(kuò)增,,,,,,,,,,IVS2,3’ UTR,A,B,C,DHPLC的三種 操作模式 ? 非變性分析（ 50 ?C ） 雙鏈DNA大小測(cè)定 ? 半變性分析（ 52-78 ?C ） 突變鑒定 ? 全變性分析（ 78-80 ?C ）

11、 Oligo和RNA分析,PCR產(chǎn)物的半變性分析（ 52-78 ?C ）,Wild typeMutant HeteroduplexesHomoduplexes,Reference Samples,PCR Products,DHPLC 檢測(cè)β地貧突變的結(jié)果,DHPLC 檢測(cè)β地貧突變的結(jié)果,DHPLC 檢測(cè)β地貧突變的結(jié)果,,RDB analysis: application to rapid prenatal diagnosi

12、sfor eight βthalassaemia mutations.,GenotypeFather CDs41-42 (?CTTT) / N MotherIVS-2-654 (C?T) / N FetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal control N / N,83 例 ? 地貧高風(fēng)險(xiǎn)胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果,( cont’d ),266 例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠的產(chǎn)前診斷結(jié)果,* Three Hb H

13、disease involved,,,,,,269 (95.7%) 孕婦實(shí)施產(chǎn)前診斷 ? 187 ?地貧 ? 83 β地貧(1雙胞胎),72(26.7%) 孕婦要求終止妊娠 ? 54 重型?地貧 ? 18 重型β地貧(1雙胞胎),69 重型地貧被預(yù)防 ? 51 水腫胎 ? 18 重型β地貧(1雙胞胎),12 孕婦不接受產(chǎn)前診斷,197例孕婦繼續(xù)妊娠,3 例HbH病出生,

14、2例水腫胎出生,,,,,,,,廣東省?和β地中海貧血預(yù)防模式研究 現(xiàn)場(chǎng)：廣東省四會(huì)市 時(shí)間：2001.1-2005.12 人口: 40萬 目標(biāo): 為制定2006年廣東省全境地貧 預(yù)防計(jì)劃提供方法和經(jīng)驗(yàn),產(chǎn)前遺傳學(xué)的臨床和公共衛(wèi)生問題利用有效的公共衛(wèi)生教育資源，首先使醫(yī)生 和公眾了解更多的地貧知識(shí)和知曉選擇遺傳 服務(wù)及其對(duì)待產(chǎn)前診斷的態(tài)度是我們面臨的

15、 一個(gè)重要課題；2.為滿足大規(guī)模預(yù)防工作的需要，我們須大力 加強(qiáng)?？漆t(yī)生,遺傳咨詢師，及其他相關(guān)專業(yè) 人員的培訓(xùn)工作;,3.預(yù)防監(jiān)測(cè)系統(tǒng)建立過程中，要特別注重轉(zhuǎn)診、 病例登記、實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的把關(guān);4.政府在組織、基礎(chǔ)建設(shè)、制定政策法規(guī)和行 政管理上的主導(dǎo)作用是推動(dòng)預(yù)防計(jì)劃的關(guān)鍵 因素。,( cont’d ),結(jié)論,? 我們建立的基于醫(yī)院水平的孕婦人群的篩查 計(jì)劃可有效的降低α和β地貧的出生率? 本