二代測序技術檢測地中海貧血多種突變的研究.pdf

1、地中海貧血又稱珠蛋白生成障礙性貧血，早期的病例來自地中海地區(qū)，故稱為地中海貧血，是世界范圍內影響最大的單基因病之一，遵循孟德爾遺傳定律。該病是由珠蛋白基因的缺失或點突變所致，根據(jù)其變異的肽鏈可分為α地貧和β地貧。由于其基因缺陷的復雜、多樣，使缺乏的珠蛋白鏈類型、數(shù)量、臨床癥狀變異較大。臨床上對中、重度地中海貧血無行之有效的治療方法，給社會、家庭、個人帶來了沉重的經濟及精神負擔。故有效檢出地中海貧血患者、進行婚前孕前指導、產前診斷、避免地

2、中海貧血患兒的出生，有著極其重要的社會意義。
　　目前臨床上常用的初篩方法主要有血常規(guī)和紅細胞脆性實驗、毛細管電泳、高效液相色譜分析法，血液學結果不能確診是否患有地中海貧血，確診仍需基因診斷。目前臨床上廣泛應用的地中海貧血基因診斷方法基本是以PCR技術為基礎，其基本原理是根據(jù)特異引物、探針來檢測珠蛋白基因突變和缺失。主要有跨越斷裂點PCR技術、反向斑點雜交、突變擴增阻滯系統(tǒng)、高分辨率溶解曲線分析技術、多重連接探針擴增技術、基因芯片

3、等。上述集中基因診斷方法各有優(yōu)缺點，其共同點是只能檢測已知突變，對未知突變尚無能為力。基于各診斷方法的利弊優(yōu)缺及實驗條件等客觀要求，在選擇診斷方法時，應綜合考慮，以選出最適合的方法。
　　在對2013年1月至2014年8月來我院住院或門診的患者以及和健康體檢人員進行地中海貧血基因檢測的3715份病例分析發(fā)現(xiàn)，血常規(guī)異常組中，還是有一定比例的地中海貧血基因檢測陰性。雖然這些年分子診斷技術發(fā)展迅速，相關分子診斷如地中海貧血基因檢測技術

4、也日益成熟，但并不能檢測所有地中海貧血所有突變位點，存在臨床地中海貧血漏篩，導致地中海貧血高危兒的出生的風險。
　　近些年來，高通量測序技術得到迅猛發(fā)展，該技術能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定，具有通量高、速度快的優(yōu)點。隨著其成本不斷降低、技術不斷完善，已被廣泛應用于臨床及科研研究。提示我們可將有關技術應用到具體臨床中檢測地中海貧血多種突變，本論文主要對二代測序檢測地中海貧血方法建立及可行性評估進行研究。本試驗共