豬腦心肌炎病毒滅活疫苗的試驗(yàn)研究.pdf

1、豬腦心肌炎是由腦心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV)引起的以仔豬腦炎、心肌炎或心肌周圍炎癥和母豬繁殖障礙為主要臨床特征的急性傳染病，開展EMCV預(yù)防用生物制品研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究以我國EMCV分離毒株為材料，進(jìn)行了制苗用毒株的鑒定，病毒滅活工藝，疫苗制備和小鼠的免疫效力試驗(yàn)，為EMCV滅活疫苗的研制和開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。 采用蝕斑技術(shù)對EMCV分離株BJC3進(jìn)行了克隆純化，并對純化后

2、的毒株進(jìn)行了鑒定和生物學(xué)特性分析。結(jié)果表明，純化病毒對BHK-21細(xì)胞具有良好的適應(yīng)性，傳代對病毒滴度無顯著影響；優(yōu)化培養(yǎng)條件后，病毒滴度最高可達(dá)10<'-8.6> TCID<,50>/0.1mL；純化病毒對熱較敏感，凍融對其影響不大。按照優(yōu)化條件培養(yǎng)純化病毒，建立了種毒庫。 對滅活疫苗生產(chǎn)用滅活劑進(jìn)行了篩選，并探討了疫苗制備工藝。結(jié)果表明，1:4000的甲醛可在37℃ 20 h內(nèi)使EMCV完全滅活；0.2 mol/L，的BEI

3、可在30℃ 20 h內(nèi)使EMCV完全滅活。用以上兩種滅活劑制備的EMCV滅活疫苗均可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高的抗體水平，并能抵抗EMCV強(qiáng)毒攻擊，且兩者差異不顯著(P>0.05)。利用油乳劑，按3:5的水相與油相比例制備出EMCV雙相油佐劑滅活疫苗。 制備了4批EMCV雙相油佐劑滅活疫苗，經(jīng)檢驗(yàn)符合生物制品無菌檢驗(yàn)規(guī)程的要求。在小鼠和哺乳仔豬上進(jìn)行了EMCV滅活疫苗的安全性試驗(yàn)，在高劑量免疫后，免疫動物均無死亡和其他不良表現(xiàn)，表明該疫苗