Ⅳ型膠原在賁門癌自體熒光診斷中的意義.pdf

1、背景和目的:
　　隨著激光誘發(fā)自體熒光(Laser–induced fluorescence,LIF)光譜和圖像技術(shù)廣泛的應(yīng)用研究,它逐漸成為了一種很有發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景的組織病理診斷的新工具。其原理主要是組織內(nèi)的熒光團(tuán)吸收了低功率的激光照射,能激發(fā)組織產(chǎn)生較激發(fā)光波長更長的熒光,即自體熒光,而自體熒光的產(chǎn)生與生物體特定的分子結(jié)構(gòu)有關(guān),所以不同的生物組織由于其分子結(jié)構(gòu)的不同,其所對應(yīng)的自體熒光光譜也不同,故它能發(fā)現(xiàn)和定位可能發(fā)生癌

2、變的組織,并能鑒別正常組織和癌變組織;反之,通過收集和分析特征性熒光光譜,也可以鑒別出組織內(nèi)不同的熒光物質(zhì)。目前,自體熒光光譜的研究報道比較多,而組織自體熒光物質(zhì)各家報道不一,主要認(rèn)為酪氨酸、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、卟啉及膠原蛋白等大分子可能是組織內(nèi)的熒光物質(zhì)。所以進(jìn)一步研究組織內(nèi)這些大分子的熒光物質(zhì),就顯得十分必要。我們前期賁門癌的共聚焦自體熒光圖像研究工作發(fā)現(xiàn),其黏膜和黏膜下層有較強(qiáng)的熒光。那么,黏膜和黏膜下層的自體熒光主

3、要是由何種物質(zhì)誘發(fā)的呢?有待我們進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)通過比較胃底賁門正常組織和癌組織中Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白分布差異研究,分析胃底賁門組織癌變后Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白分布的改變對組織的自體熒光產(chǎn)生的影響,探討其熒光來源和膠原蛋白在胃底賁門癌診斷中物質(zhì)來源的意義。
　　材料和方法:
　　本實(shí)驗(yàn)通過對16例經(jīng)病理檢查證實(shí)為胃底賁門癌與同體正常胃體組織,分別采用特異性和靈敏性高的鏈霉親和素-生物素化過氧化物酶復(fù)合物法(SABC法)對Ⅲ、Ⅳ型膠原

4、蛋白在胃底賁門正常組織和癌變組織中的分布進(jìn)行自身對照檢測,然后采用半定量計(jì)分法分析Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白在16例賁門癌病人正常和癌組織中的分布差異,并同過與激光共聚焦掃描圖像結(jié)果進(jìn)行對比分析。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果Ⅲ、Ⅳ型膠原在組織中的分布特點(diǎn):正常組織細(xì)胞外基質(zhì)中,特別是基底膜呈現(xiàn)很強(qiáng)的Ⅳ型膠原抗體陽性反應(yīng),在基底膜形成較粗的環(huán)形染色帶;而Ⅲ型膠原抗體陽性反應(yīng)在細(xì)胞外間質(zhì)呈連續(xù)的細(xì)絲纖維樣(圖5,7)。癌組

5、織中Ⅳ型膠原抗體反應(yīng)在癌巢周邊為陰性,或僅在殘存的基底膜有點(diǎn)狀片斷的陽性反應(yīng);而Ⅲ型膠原在癌間質(zhì)中的抗體陽性反應(yīng)較正常組織變化不明顯,或還稍有增強(qiáng)(如附圖6,8)。采用統(tǒng)計(jì)方法 Kruskal-Wallis test檢驗(yàn),其中Ⅲ型膠原正常與癌變組織比較d0.05=7.75,P>0.05,其差異無明顯顯著性;Ⅳ型膠原正常與癌變組織比較13.420.001d=, P<0.001,其差異有高度顯著性。
　　2.與激光共聚焦掃描圖像對比的

6、結(jié)果Ⅳ型膠原在正常組織和癌變組織中的分布改變與激光共聚焦掃描圖像熒光信號相一致:正常胃體組織胃壁各層中,以黏膜下層熒光信號最強(qiáng);癌組織與正常組織各層相比熒光信號均顯著減弱,在紅綠合成圖像上呈微弱的青綠色;被癌細(xì)胞浸潤的黏膜下層,其自體熒光信號的連續(xù)性均被破壞[13,14]。
　　結(jié)論:
　　胃底賁門組織癌變后,細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)Ⅳ型膠原顯著減少,而Ⅲ型膠原減少不明顯,熒光信號的強(qiáng)弱可能與Ⅳ型膠原蛋白破壞有關(guān),而與Ⅲ型膠原蛋白無關(guān);