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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分、肝細(xì)胞癌中關(guān)鍵基因與microRNA的鑒別和交互作用的生物信息學(xué)分析目的:鑒別促進(jìn)HCC發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵基因和miRNA及其潛在的分子機(jī)制。
方法:
從GEO數(shù)據(jù)庫(kù)分別下載包含mRNA和miRNA表達(dá)譜的微陣列數(shù)據(jù)集GSE22058,GSE25097和GSE57958,并使用GEO2R進(jìn)行癌及癌旁組織基因差異性分析。使用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異基因進(jìn)行功能和通路富集分析。使用Cytoscape軟件構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)
2、。最后,使用miRDB預(yù)測(cè)差異表達(dá)的microRNA的靶基因。
結(jié)果:
通過(guò)分析得到115個(gè)DEGs,其中包括52個(gè)上調(diào)基因和63個(gè)下調(diào)基因。功能和通路富集分析提示上調(diào)基因主要富集于染色體分離和細(xì)胞分裂過(guò)程,而下調(diào)基因主要參與補(bǔ)體激活、蛋白激活級(jí)聯(lián)、羧酸代謝過(guò)程、含氧酸代謝過(guò)程及免疫反應(yīng)。通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)分析篩選18個(gè)核心基因,其中ESR1與FOXO1、CXCL12和GNAO1具有密切的相互作用。同時(shí),分析得到64個(gè)D
3、EMs,其中hsa-mir-18a和hsa-mir-221等5種miRNA可能對(duì)ESR1有靶向調(diào)控作用。
結(jié)論:
ESR1及CXCL12等DEGs與has-mir-221等DEMs的相互作用可能在HCC的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,這可能為HCC患者的診斷和治療提供新的線(xiàn)索。
第二部分、EDNRB基因?qū)Ω伟┘?xì)胞株SMMC-7721及Huh7的遷移和侵襲能力的影響目的:探討EDNRB基因?qū)θ烁伟┘?xì)胞遷移及侵襲能力的
4、影響。
方法:
應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot法檢測(cè)EDNRB基因mRNA和蛋白在人肝癌細(xì)胞株(SMMC-7721和Huh7),人肝細(xì)胞株LO2以及HCC組織及其癌旁的相應(yīng)組織中的表達(dá)情況。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)EDNRB基因的細(xì)胞株SMMC-7721-E和Huh7-E,應(yīng)用CCK-8法及Transwell小室法分別檢測(cè)EDNRB基因?qū)Ω伟┘?xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的影響。
結(jié)果:
5、r> EDNRB mRNA在SMMC-7721和Huh7細(xì)胞中低于LO2細(xì)胞;HCC組織中EDNRB mRNA的表達(dá)水平低于相匹配的癌旁組織(P<0.01)。SMMC-7721和Huh7細(xì)胞中EDNRB蛋白表達(dá)低于LO2細(xì)胞;HCC組織中EDNRB蛋白的表達(dá)低于其相匹配的癌旁組織(P<0.01)。EDNRB基因過(guò)表達(dá)對(duì)SMMC-7721和Huh7細(xì)胞的增殖無(wú)顯著影響(p值均>0.05),但能抑制其遷移和侵襲(p值均<0.01)。
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