胃癌組織細胞中NGAL基因表達及其調控機制研究.pdf

1、近年來,許多研究表明,中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白編碼基因NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)是人類的一個重要的腫瘤相關基因,在結腸癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、皮膚癌和食管癌等腫瘤中高表達,然而,在胃癌中NGAL基因的表達情況如何目前尚不清楚。在本文中,我們首先檢測了NGAL基因在胃癌組織細胞中的表達情況,其次還研究了胃癌細胞中NGAL基因的表達調控機制。期望為全面認識NGA

2、L基因的腫瘤生物學功能提供更多資料。
　　研究內容和方法:
　　1.采取免疫組織化學技術對55例胃癌及其相對應的正常胃腺上皮石蠟包埋組織樣品中NGAL基因的表達情況進行檢測。
　　2.聯(lián)合運用蛋白印跡和RT-PCR技術對兩種胃癌細胞系BGC-823和SGC-7901中NGAL基因的表達情況進行檢測。
　　3.將NGAL基因5'側翼調控區(qū)不同長度片段分別插入到質粒pGL3-Basic中,構建NGAL基因5'側翼調控

3、區(qū)系列熒光素酶報告基因表達載體。
　　4.利用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)研究確定,在胃癌細胞系BGC-823和SGC-7901中, NGAL基因啟動子核心元件所在區(qū)域。
　　5.結合突變與缺失技術,研究胃癌細胞中NGAL基因啟動子區(qū)元件的TPA反應性。
　　6.通過蛋白印跡技術,結合生物信息學預測分析,確定胃癌細胞中NGAL基因的轉錄激活因子,初步探討TPA誘導NGAL基因表達的細胞信號轉導通路。
　　研究結果:

4、
　　1.免疫組織化學檢測結果表明,NGAL基因在正常胃腺上皮中不表達或表達很弱,而在胃癌組織中表達很強,陽性信號彌散于整個胞漿。
　　2.兩個胃癌細胞系中NGAL基因表達有較大差別,BGC-823中NGAL基因表達水平明顯高于SGC-7901。
　　3.雙熒光素酶報告基因檢測結果表明,在兩個不同的胃癌細胞系中,NGAL基因啟動子核心元件所在區(qū)域不一樣;在BGC-823細胞中,NGAL基因啟動子核心元件位于基因5'側翼

5、區(qū)-110~-79;在SGC-7901細胞中,NGAL基因啟動子核心元件位于基因5'側翼區(qū)-152~-141。
　　4.研究發(fā)現(xiàn),在胃癌細胞系BGC-823和SGC-7901中,NGAL基因的啟動子均有TPA反應性。
　　5.在胃癌細胞系BGC-823和SGC-7901中,NGAL基因啟動子的TPA反應元件位于基因5'側翼區(qū)-85~-79。
　　6.在生物信息學預測基礎上,通過蛋白印跡實驗確定,在胃癌細胞系BGC-82

6、3中,可能由ERK細胞轉導信號途徑介導了NGAL基因的TPA反應性,AP1可能是其中的轉錄激活因子。
　　結論:
　　1.胃癌組織細胞中,NGAL基因高表達。
　　2.在胃癌細胞系BGC-823和SGC-7901中,NGAL基因的表達存在著較大的差別。
　　3.在胃癌細胞系BGC-823和SGC-7901中,NGAL基因啟動子的核心元件不同。
　　4.在胃癌細胞中,NGAL基因的啟動子有TPA反應性,其TP