陜西山豆根提取物體外對人食管癌Eca-109細胞抗增殖及誘導(dǎo)凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：惡性腫瘤嚴重威脅著人類的健康和生命，人們努力嘗試各種治療方法。臨床應(yīng)用證明，中草藥具有較好的抗腫瘤作用，不僅對化、放療起減毒、增敏、增效的效應(yīng)，而且能夠預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，在惡性腫瘤治療中顯示出其獨特的優(yōu)勢。關(guān)于中草藥的有效成分及作用機理的研究越來越受關(guān)注，如長春新堿(VCR)、紫杉醇(PTX)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床，并取得了良好的臨床效果。但是，目前應(yīng)用于臨床的中草藥有效成分藥仍較少，因此，從中草藥中研發(fā)新的抗腫瘤藥成為惡性腫瘤治療

2、的重要課題之一。 山豆根作為一種傳統(tǒng)的中草藥，具有清火、解毒、消腫、止痛之功效。有關(guān)其抗腫瘤作用有較多的報道，如用山豆根治療肝癌、食道癌、肺癌、白血病等由來已久。現(xiàn)代藥理研究證明山豆根具有廣泛的藥理活性。先后證明山豆根水提物灌服或注射對多種實驗性腫瘤有抑制作用，其水提物和醇提物均能抑制多種腫瘤生長，能抑制體外培養(yǎng)的人肝癌細胞的增殖。因此，陜西山豆根抗腫瘤活性及作用機制的研究有廣泛的應(yīng)用價值。 方法： 1、MTT法

3、測定山豆根提取物對Eca-109細胞的生長抑制率。 ①實驗組：加入不同濃度的山豆根提取物； ②陽性對照組：加入長春新堿； ③空白對照組：加入等體積的生理鹽水。 每個濃度設(shè)四個平行孔，作用于Eca-109細胞后，測定細胞生長抑制率，計算出IC<,50>值。同時用MTT法繪制山豆根提取物作用于Eca～109細胞的生長曲線，設(shè)空白對照組。以上實驗各重復(fù)3次，求平均值。 2、通過光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、H

4、E染色法對細胞形念進行系列觀察，利用流式細胞儀及瓊脂糖凝膠電泳法觀察Eca-109細胞的周期變化及細胞凋亡。 結(jié)果： 1、山豆根提取物對Eca-109細胞的增殖抑制作用 1.1 山豆根提取物列Eca-109細胞生長有明顯的抑制作用。且抑制率有明顯的劑量依賴性，P均<0.05。 1.2 山豆根提取物處理Eca-109細胞的IC<,50>為17.27±2.21ug/ml。實驗組與空白對照組OD值的差異均有統(tǒng)計

5、學(xué)意義，與陽性對照組相比無明顯差異。 1.3 從生長曲線來看，兩種濃度的山豆根提取物(30ug/ml，20ug/ml)處理Eca-109細胞7d，每天三組兩兩相比有統(tǒng)計學(xué)意義。 1.4 山豆根提取物對細胞周期的影響。山豆根處理Eca-109細胞48h后與空白對照組比較，細胞周期發(fā)生明顯變化，且呈劑量依賴關(guān)系，并看到凋亡峰。 2 山豆根提取物誘導(dǎo)Eca-109細胞凋亡的作用山豆根提取物20ug/ml作用于Eca-1